肝癌细胞株HepG2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立.pdf

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第８卷第１期２００８年１月科学技术与工程Ｖｏ１．８Ｎｏ．１Ｊａｎ．２００８

１６７１—１８１９（２００８）１—０１６１—０３ＳｃｉｅｎｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ⑥２００８Ｓｅｉ．Ｔｅｃｈ．Ｅｎｇｎｇ．

医药卫生

肝癌细胞株ＨｅｐＧ２的Ｇ１期细胞

蛋白质组双向电泳图谱的建立

白瑞霞王文礼李丽梅刘婷叶纪诚

（内蒙古医学院生物化学与分子生物学教研室，呼和浩特０１００５９）

摘要采用双向电泳分离肝癌细胞株ＨｅｐＧ２的Ｇ１期细胞的蛋白质，经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析显示：在ｐＨ３—

１Ｏ，１３ｃｍ的ＩＰＧ胶条上，可分离到２２７个重复性及分辨率均较好的蛋白斑点，蛋白斑点的匹配率为８４％。建立了ＨｅｐＧ２的

Ｇ１期细胞蛋白质组双向电泳图谱，为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。

关键词双向电泳ＨｅｐＧ２细胞蛋白质组

中图法分类号Ｒ３４９．３；文献标志码Ｂ

随着人类基因组计划的实施和推进，生命科学白质分子量标准：１４ＫＤ－－－Ｏ７ＫＤ购自Ａｍｒｅｓｃｏ公司；

已进入了后基因组时代。在这个时代，蛋白质组学２．Ｄ．Ｃｌｅａｎ．ｕｐＫｉｔ试剂盒购自ＧＥＨｅａｈｈｃａｒｅＢｉｏ—Ｓｃｉ—

是其研究的核心内容之一¨。双向电泳（Ｔｗｏ—ｄｉ．ｅｎｃｅｓ公司；ＴＥＭＥＤ购自ｓｉｇｍａ公司，ＩＰＧＢｕｆｆｅｒ购

ｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｍｐｈｏｒｅｓｉｓ，２－ＤＥ）技术可以高通量、高自ＧＥＨｅａｈｈｃａｒｅＢｉｏ—Ｓｃｉｅｎｃｅｓ公司；ＩＰＧ胶条ｐＨ３—

灵敏地对蛋白质进行分离、纯化和鉴定，而且具有１０，１３ｃｍ购自ＧＥＨｅａｈｈｃａｒｅＢｉｏ．Ｓｃｉｅｎｃｅｓ公司；其

高分辨率、高重复性和兼具微量制备的性能等优它常规试剂均购自ＧＥＨｅａｈｈｃａｒｅＢｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ公司

点，因而成为蛋白质组研究的核心技术。本实验以和ｓｉｇｍａ公司。

肝癌细胞株ＨｅｐＧ２的Ｇ１期为研究对象，采用蛋白１．２主要仪器

组学的研究技术，以双向凝胶电泳分离蛋白质。本双光速可见紫外分光光度计（ｕＶ—３８０２）购自

研究旨在建立肝癌细胞株ＨｅｐＧ２的Ｇ１期细胞的双尤尼柯（上海）仪器有限公司；双向电泳系统购自

向电泳蛋白质图谱，以便进一步深入了解肝癌与细ＧＥＨｅａｈｈｃａｒｅＢｉｏ．Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；图像扫描分析一Ｐｒｏｘ—

胞周期之间的联系，为其蛋白质组学研究奠定基础。ｐｒｅｓｓ２Ｄ蛋白凝胶成像系统购自ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司；

超声波细胞粉碎机（ＪＹ９６一Ⅱ）购自宁波科生仪器

１材料与方法厂；流式细胞仪（ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒ）购自美国ＢＤ公司；

质谱仪（ＡＵＴＯＦＬＥＸ）购自ｂｒｕｋｅｒ公司。

１．１材料１．３细胞同步化

肝癌细胞株ＨｅｐＧ２：由解放军３０４医院提供；蛋取对数生长期的ＨｅｐＧ２细胞，加入含终浓度为

２．５ｍｍｏｌ／Ｌ的ＴｄＲ培养２８ｈ后收集细胞为Ｇ１期

２００７年９月２１日收到内蒙古医学院重大科研项目