2017整理单克隆抗体与基因工程抗体.ppt

单克隆抗体与基因工程抗体 中山医科大学免疫学教研室 张春艳 多克隆抗体(Polyclonal antibody) 一. 概念 给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物, 它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的, 称为多克隆抗体. 二. 多克隆抗体的应用 免疫学检测 被动免疫治疗和紧急预防 三.存在问题 特异性差, 用于免疫学检测容易出现交叉反应 单克隆抗体(Monoclonal antibody,McAb) 一.概念: 通过B细胞杂交瘤技术, 获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体. 二.B细胞杂交瘤的类型 小鼠-小鼠 大鼠-大鼠 小鼠-人 人-人 三..杂交瘤技术的原理 1.亲本细胞的选择 小鼠骨髓瘤细胞 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶 (HGPRT) 缺陷型 免疫脾细胞 经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾脏 2. 细胞融合 骨髓瘤细胞 PEG 杂交瘤细胞 脾细胞 融合后细胞的类型: 未融合的脾细胞 杂交瘤细胞 未融合的瘤细胞 3 杂交瘤细胞的选择性培养 DNA合成的途径： 糖+氨基酸 氨基喋呤 (Aminopterin,A) TK 核苷酸 DNA 胸腺嘧啶核苷 TMP (Thymidine,T) 核苷酸前体 次黄嘌呤 HGPRT IMP (Hypoxanthine, H) 融合后细胞在HAT培养基中存活情况 脾细胞（ HGPRT+, TK+, 不能长期生长） 骨髓瘤细胞（ HGPRT-, TK-，不能生长 ） 杂交瘤细胞（ HGPRT+, TK+ ，能够生长） 4. 杂交瘤细胞的筛选和克隆化 筛选： 免疫荧光 ELISA等 克隆化： 有限稀释法 单个细胞显微操作法 软琼脂培养法 5. 单克隆抗体的生产 体内：BALB/c小鼠体内诱发含有单抗的 腹水 体外：无血清培养基悬浮培养等 6. 单克隆抗体的纯化 硫酸铵沉淀法 离子交换层析 A蛋白-Sepharose亲和层析 四. 单克隆抗体的特性 高度均一性： 纯度很高的均一性抗体 高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定 簇起反应 大量产生及稳定性： 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖 之传代 五 .单克隆抗体在医学上的应用 （一）用作诊断试剂 1. 检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化 阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。 2. 鉴定病原体，准确诊断传染病。 3. 用于肿瘤的诊断和分型 4. 激素类单抗用于测定体内激素含量，判 断内分泌的功能状态 （二）用作研究工具 纯化抗原 分析和探查抗原结构 分析抗原决定簇分子的功能 （三）用于疾病的治疗 抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反应的防治 抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗 抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗 单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题 单克隆抗体的特异性 由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对肿瘤有严格特异性的单抗，对正常组织有交叉反应 异种抗体反应 鼠源性