水稻灌浆初期高温胁迫下的籽粒全长cDNA文库构建的中期报告.docx

水稻灌浆初期高温胁迫下的籽粒全长cDNA文库构建的中期报告 本次实验旨在构建水稻灌浆初期高温胁迫下的籽粒全长cDNA文库，为后续分子研究提供基础数据。 实验步骤如下： 1. 取高温胁迫下的水稻籽粒进行RNA提取，采用Trizol法提取总RNA。使用NanoDrop进行纯度检测和浓度测定。 2. 进行mRNA纯化，利用Oligo(dT)25磁珠纯化mRNA，去除rRNA和tRNA等。 3. mRNA 5端接头和3端接头的连接。采用接头接转反应，将被头化的mRNA反转录成为cDNA。 4. 二次PCR扩增。将一次PCR产物使用AxyPrep Mag PCR Clean-up Kit纯化，并进行二次PCR扩增。 5. 构建文库。将二次PCR产物连接到T Vector（pMD18-T），转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中，进行白光菌落筛选和PCR确认。 目前实验已完成RNA提取、mRNA纯化、接头连接、一次PCR扩增和二次PCR扩增等步骤，成功构建出了一定数量的cDNA文库。 接下来将进行文库质检、白光菌落筛选和PCR确认等步骤，确保构建出的文库质量优良，为后续分子研究提供可靠的数据基础。