青霉菌灭活菌丝体诱导的烟草抑制消减杂交cDNA表达文库的构建的中期报告.docx

青霉菌灭活菌丝体诱导的烟草抑制消减杂交cDNA表达文库的构建的中期报告 本研究旨在构建青霉菌灭活菌丝体（PHA）诱导的烟草抑制消减杂交cDNA表达文库，以深入研究烟草对PHA的响应机制。目前已完成中间步骤，包括RNA提取、纯化和反转录，以及抑制消减杂交（SSH）反应。下面是详细的实验进展报告： 1. RNA提取及纯化 采用TRIzol法从PHA处理的烟草组织中提取总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、比色计和Agilent 2100生物分析仪对RNA进行质量和纯度分析。结果显示RNA条带清晰、完整，A260/A280比值在1.8-2.0之间，符合RNA纯度要求。 2. 反转录 使用SMARTer cDNA合成试剂盒对RNA进行反转录。反转录产物的完整性和大小分别通过琼脂糖凝胶电泳和Agilent 2100生物分析仪进行分析。结果表明，反转录产物中含有高质量的cDNA，总丰度约为4μg。 3. 抑制消减杂交（SSH） 使用Clontech PCR Select cDNA Subtraction Kit对PHA处理和对照的烟草样品进行SSH反应。反应产物进行PCR扩增和克隆，然后进行测序分析。初步结果表明，已获得大量的差异性表达序列，将为进一步筛选、鉴定和数学分析提供基础。 通过中间步骤的实验，成功构建了PHA诱导烟草SSH-cDNA文库，为后续进一步研究提供了重要的样品资源。在下一阶段，我们将进行差异表达序列的筛选和鉴定，并利用生物信息学方法对差异表达基因进行分析和挖掘。