MM_FS_CNJ_0126出口肉及肉制品中竹桃霉素残留量检验方法.doc
MM_FS_CNJ_0126出口肉肉制品猪肉竹桃霉素残留量杯碟法
MM_FS_CNJ_0126
出口肉及肉制品中竹桃霉素残留量检验方法
1.适用范围
本方法适用于出口猪肉中竹桃霉素残留量的检验。
±0.1)提取试样中的竹桃霉素残留物，离心后取上清液作为样液，以藤黄微球菌作为指示菌，用杯碟法进行测定，根据所产生抑菌圈的大小用标准曲线法定量。
±0.1)：精确称取无水磷酸二氢钾0.523g和无水磷酸氢二钾16.73g，溶解于1000mL水中，于121℃高压灭菌15min；
试验菌种：藤黄微球菌(Micrococcusluteus)，菌号CMCC28001，中国药品生物制品检定所提供；
竹桃霉素标准品：纯度≥95％。美国SIGMA化学制品公司提供，或等效品。密封、防潮、避光保存于4℃冰箱；
竹桃霉素标准储备液：准确称取适量的竹桃霉素标准品，溶于约2mL甲醇中，再用磷酸盐缓冲液稀释，配制成浓度为250μg/mL的标准储备液。4℃冰箱中保存，可使用5天；
μg/mL的标准中间液。使用当天配制；
μμμg/mL浓度为判断阴性对照浓度；
培养基Ⅰ(见附录A中A1)；
培养基Ⅱ(见附录A中A2)。
恒温培养箱：(26±1)℃，搁板必须水平；
震荡培养箱：(30±1)℃；
培养皿：内径90mm、底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，配陶瓦盖，或玻璃盖内嵌入干燥的滤纸；
±±±0.1)mm；
游标卡尺：测量范围0～200mm，精度0.02mm。或抑菌圈测量仪；
均质器：不低于8000r/min；
离心机：不低于4000r/min；
半对数坐标纸；
以不超过2500件商品为一检验批。
同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。
批量，件
最低抽样数，件
1～25
1
26～100
5
101～250
10
251～500
15
501～1000
17
1001～2500
20
按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品。如果每件内无小包装或有小包装但其重量超过2kg，则可用无菌刀具从每件内割取不少于100g，混合后置于清洁容器中，作为混合原始样品。原始样品总量不得少于2kg，加封后，标明标记，及时送交实验室。
从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分用绞碎机绞碎，充分混匀，用四分法缩分出不少于500g作为试样。装入清洁容器中，加封后，标明标记。
将试样于－18℃以下冷冻保存。
注：在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
称取试样约10g(精确至0.1g)，置于均质杯中，加入10.0mL磷酸盐缓冲液，小心搅匀。放置60min后，于8000～10000r/min均质2min，移入离心管中，于4000r/min离心20min，取上清液作为样液。
将试验菌种接种于装有培养基Ⅰ的试管中，于(30±1)℃培养24h。吸取约1mL该培养物接种于装有50mL培养基Ⅰ的锥形瓶中，于(30±1)℃震荡培养18～20h。此培养物即为菌悬液，贮于4℃冰箱中可使用1周。
制备前，先预测一下藤黄微球菌悬液的最佳用量。方法是先用不同量的菌悬液加到培养基Ⅱμg/mL竹桃霉素标准工作液时直径在16mm以上)且清晰的抑菌圈，菌悬液的该加入量即为最佳用量。
平板制备时，先向培养皿中加入20mL融化的培养基Ⅱ，保持水平，待其凝固。将最佳用量的菌悬液加入到事先融化并冷却至45～50℃的培养基Ⅱ中，充分混匀后，向每个培养皿中基层琼脂上加4mL，使其均匀分布，并保持水平，凝固后即为检定用平板。所用平板需当天制备。
—92中6.1进行，但标准工作液用4.2.6中所制备的一组标准工作液。
每份样液用3个检定平板。在每个平板上置6只牛津杯，使其在半径约28mm的圆周上呈60°μg/mL的竹桃霉素标准工作液。于(26±1)℃培养(17±1)h。翻转平板，除去牛津杯。如有抑菌圈产生，精确测量其直径。
在3个检定平板上，各浓度竹桃霉素标准工作液均出现适当大小的清晰抑菌圈时，如样液抑菌圈直径的平均值＜10mm，即报告试样中竹桃霉素残留为“阴性”。如样液抑菌圈直径的平均值≥10mm，经校正后从标准曲线上查出相应的竹桃霉素浓度值，再用式(1)计算出试样中竹桃霉素残留含量。
X＝
c
…………(1)
m
式中：X——试样中竹桃霉素残留含量，mg/kg；
c——于标准曲线上查出的样液中竹桃霉素浓度值，μg/mL；
m——最终样液所代表的试样的质量浓度，g/mL。
注：如测定结果呈阳性，必要时尚需进行确证试验(确证