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常见缓冲溶液配制.pdf

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实验室常用缓冲液配置方案

1)1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)

组份浓度:1MTris-HCl

配制量:1L

配制方法:

1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

PH值浓HCl

7.4约70ml

7.6约60ml

8.0约42ml

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,

温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2)10×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)

组份浓度:100mMTris-HCl,10mMEDTA

配制量:1L

配制方法:

1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。

1MTris-HClBuffer(PH7.4,7.6,8.0)100ml

500mMEDTA(PH8.0)20ml

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,均匀混合。

3.将溶液定容至1L后,高温高压灭菌。

4.室温保存。

3)1.5MTris-HCl(pH8.8)

组份浓度:1.5MTris-HCl

配制量:1L

配制方法:

1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调节pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,

温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4)3M醋酸钠(pH5.2)

组份浓度:3M醋酸钠

配制量:100ml

配制方法:

1.称量40.8gNaAc·3H2O(或者24.6g无水NaAc)置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的

去离子水搅拌溶解

2.加入冰醋酸调节pH值至5.2

3.加去离子水将溶液定容至100ml

4高温高压灭菌后,室温保存。

5)PBSBuffer

组份浓度:137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4

配制量:1L

配制方法:

1.称量下列试剂,置于1L烧杯中。

NaCl8g

KCl0.2g

Na2HPO41.42g

KH2PO40.27g

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后,室温保存。

注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mM

MgCl2。

6)10M醋酸铵

组份浓度:10M醋酸铵

配制量:100ml

配制方法:

1.称量77.1g醋酸铵置于100~200ml烧杯中,加入约30ml的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

7)苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)

配制方法:

1.说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋

白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后,移入棕色

玻璃瓶中4℃保存。

8)10%(W/V)SDS

组份浓度:10%(W/V)SDS

配制量:100ml

配制方法:

1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水,68℃加入溶解

2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2

3.将溶液定容至100ml后,室温保存。

9)2NNaOH

组份浓

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