培养基与胰酶配制.ppt

实验二 、培养基及胰酶的配制 血清的主要成分及含量 消 化 液 0.1-0.25% 胰酶 0.02% EDTA pH=8.0 * * 一、实验原理： （一）细胞培养的气体环境与pH环境 ( 二）细胞培养的营养条件 1. 培养用液 培养液（基）、缓冲液、平衡盐溶液、血清及消化液、pH调节液和抗生素等。 培养基的主要种类（基础培养基） (1) MEM (低限量基础培养基，minimum eessential media): (2) DMEM(Dulbecco’s modified Eagle medium) (3) IMDM(Iscove’s modified Dulbecco’s medium) (4) RPMI1640 (5) HamF10、 HamF12 (6) McCoy’s 5A 二、实验目的 1. 掌握DMEM培养基、胰酶的配制 2. 学习针头滤器的使用方法 三、实验步骤 (一） DMEM培养基的配制 1. 三袋DMEM粉末用双蒸水溶解（先加入2/3DDW，再用DDW冲洗袋子）、磁力搅拌器搅拌半小时以上。 2. 加入1.2g/袋 NaHCO3定容3000 mL、搅拌30分钟。 每人在超净台内用大滤器过滤、分装、写好种类、名字。（留取少许做污染测试放CO2培养箱72小时） 3. 每8个人为一组，每人过滤90 mL，其余的过滤到100 mL试剂瓶中，每瓶90mL培养基备用。 使用前在超净台内加入56℃灭活好的FCS 10 mL，使血清的终浓度为10%，4℃保存待用。 *