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培养基的配制和灭菌

一、目的和要求：明确培养基的配制原理；掌握培养基的方法。

二、基本原理：培养基是按微生物的生长繁殖需要而人工配制成的营养基质，其中含有能

源物质、碳源物质、氮源物质、无机盐类、生长因素和水分等。培养基还必须具备有

利于微生物进行代谢活动的各种合适条件，如一定的酸碱度、渗透压、氧化还原电势

等。培养基按组成材料的可分为天然培养基（其中主要成分是天然物质）、合成培

养基（用各种纯粹的化学药品，按一定比例配制而成）以及介于二者之间的半合成培

养基三类。按培养基的性状可分为液体培养基、固体培养基（在液体培养基中加

入1.5—2%的凝固剂）和半固体培养基（在液体培养基中加入0.2-0.5%的凝固剂）三

类。

三、仪器和材料

（一）仪器：扭力天平、分析天平、蒸汽器。

（二）材料：马铃薯、蛋白胨、牛肉膏、可溶性淀粉、葡萄糖、NaCl、KHPO、MgSO·7HO、

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FeSO、KNO、2NNaOH、1NHCl、蒸馏水、琼脂。

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（三）其它：电炉、石棉网、铁架台、漏斗、弹簧夹、乳胶管、量筒、烧杯、三角瓶、试

管、玻棒、药勺、称量纸、pH试纸（pH5.5—9.0）

四、步骤和方法

（一）肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）

１、成分

牛肉膏5g

蛋白胨10g

NaCl5g

水1000ml

固体培养基加琼脂15—20g

半固体培养基加琼脂2—5g

调pH至7.5左右

２、

（1）称量并溶化：按培养基成分，在天平上称各种药品放在烧杯内，加入一定量的水，加

热，并不断搅拌，直至完全溶化。

（2）调pH值：初制膏蛋白胨培养基呈酸性，需用NaOH调节pH为7.5左右，通常用

pH试纸测定。

３、分装：根据需要，将制好的培养基分装入试管或三角瓶内。分装试管时，取一玻璃漏

斗，置于铁架台上，漏斗下接一乳胶管，其下端再接一玻璃滴管。乳胶管上装一弹簧夹。

分装时一手拿试管，另一手控制弹簧夹（图2）。固体培养基装入量以试管高的1/5为宜，

半固体培养基一般以试管高的1/3为宜。试管口勿沾培养基。瓶口或管口塞上大小松紧

合适的棉塞（或塑料套、万用塞），棉塞的3/5应在三角瓶或试管内（图3）。

４、包扎：试管扎成捆。试管和三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸，纸上标明培养基的名称和

配制日期等。