微生物培养基的配制和灭菌.ppt

Exercisesix微生物培养基的配制和灭菌制作者：黄海婵（）Tel:0571or0571目的要求实验材料实验程序实验内容明确培养基的配制原理和方法，掌握其配制的一般方法和步骤。1了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。2熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。3目的要求药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O等。仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。其它物品：天平、牛角匙、电炉、1NHCl、1NNaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、各种包装纸、牛皮纸、绳索、棉花、标签等。123实验材料010203培养基的配制微生物常用器皿的准备培养基和玻璃器材的灭菌方法实验程序实验程序1（培养基的配制）培养基的种类01培养基的配制方法和步骤02培养基的配方及配制分组03据组成成分可分为:1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。从培养基的物理状态可分为1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2～0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。0102实验程序1－1（培养基的种类）实验程序1－1（培养基的种类）常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。实验程序1－2（培养基的配制方法和步骤）称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。调pH值：用1NNaOH或1NHCl调pH，用pH试纸对照。加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。过滤分装：注意不要污染棉塞。包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。灭菌摆斜面检查：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。按培养基

配方称量加水加

热熔化调节

pH值过滤分装

包装灭菌检查灭菌

彻底与否实验程序1－2（培养基的配制方法和步骤）摆斜面分装实验程序1－2（培养基的配制方法和步骤）包扎实验程序1－2（培养基的配制方法和步骤）灭菌高压蒸汽灭菌法干热灭菌法紫外线杀菌法祥看实验程序4中的具体内容培养基的配制和灭菌过程中的注意事项蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。pH不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上以免污染棉塞而引起污染。称药品时严防药品混杂，一把牛交匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。不能灭菌的物质：爆炸性物质硝化丙烷、硝化甘油、硝化纤维，含氮硅酯。三硝基苯、三硝基甲苯、苦味酸、和其它爆炸性含氮复合物。过醋酸、过氧化甲乙酮、过氧化苯甲酰和其它过氧化有机物。lgnitable物质金属锂、钾、钠、黄磷、氧化硫，和红磷。培养基的配制和灭菌过程中的注意事项实验程序2－1（培养基的配方及配制分组）牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（用于分离和培养细菌，是一种天然培养基）配方如下（书中P50和P214）：