第二章 基因工程制药演示课件.ppt

一、医药生物技术产品质量保证的一般性要点 3. 严格控制条件 宿主细胞中表达的天然基因，转录或翻译后，或精制、工艺放大过 程中，都有可能发生变化，故从原料到制成品制备全过程的每一步都 须严格控制条件与鉴定质量，确保符合标准规格、安全有效。 精选编制 二、生物材料的质量控制 原材料的质量控制是要确保编码药品的DNA序列的正确性， 重组微生物来自单一克隆，所用质粒纯而稳定，以保证产品质量的 安全性和一致性，所以原材料的质量控制主要是对目的基因、表达 载体以及宿主细胞的检查。 精选编制 1.目的基因 根据指控要求，需明确目的基因的来源、克隆经过；对于改造 过的基因应说明被修改的密码子、被切除的肽段及拼接的方法； 使用PCR技术扩增得到的基因，应说明扩增的模板、引物及酶反应 条件等情况，并以限制性内切酶酶切图谱和核苷酸序列等分析方法 确证基因结构的正确无误。 二、生物材料的质量控制 精选编制 2. 表达载体 应提供表达载体的名称、结构、遗传特性及其各组成部分(如复制 子、启动子)的来源与功能，构建中所用位点的酶切图谱，抗生素抗性 标记物等。 二、生物材料的质量控制 精选编制 3.宿主细胞 应提供宿主细胞的名称、来源、传代历史、检定结果及其 生物学特性等；需阐明载体引入宿主细胞的方法及载体在宿主 细胞内的状态，是否整合到染色体内及拷贝数，并证明宿主细 胞与载体结合后的遗传稳定性；提供插入基因与表达载体两侧 端控制区内的核苷酸序列，详细叙述在生产过程中，启动与控 制克隆基因在宿主细胞中表达的方法及水平。 二、生物材料的质量控制 精选编制 在贮存中，要求种子克隆纯而稳定；在培养过积中，要求质粒稳定，始终无突变；重复生产发酵中，工程菌表达稳定；始终能排除外源微生物污染。 三、培养过程的质量控制 精选编制 1. 选择合适的宿主菌 2. 选择合适的载体 3. 选择压力 4. 分阶段控制培养 5. 控制培养条件 6. 固定化 二、提高质粒稳定性的方法 精选编制 一、工程菌选择 二、反应器（发酵罐）设计 三、发酵培养基组成 四、工艺最佳化与参数监测控制 第五节 基因工程菌中试 精选编制 一、基因工程菌的培养方式 二、基因工程菌的培养工艺 三、基因工程菌的培养设备 第六节 重组工程菌的培养 精选编制 基因工程产品纯化前的性质： ①目的产物在体系中含量较低 ②体系中组份复杂（细胞、代谢物、残留培养基及无机盐等） ③目的产物稳定性差：对pH、温度、金属离子、有机溶剂、 剪切力、表面活性剂等十分敏感，容易失活、变性。 第七节 基因工程药物的分离纯化 精选编制 一、建立分离纯化工艺需了解的各种因素 1. 含目的产物的初始物料的特点 利用基因工程菌进行发酵生产的产物，其上游过程中的各种因素 均对分离纯化技术和工艺有直接影响。这些因素包括： （1）菌种类型、形式，各种生物学性质，产物和副产物种类、 产物在细胞内所处的位置，表达方式（胞内、胞外、包含体）， 代谢物种类，产物类似物、毒素和能降解产物的酶类等； （2）原材料和培养基的来源及质量是否稳定； （3）生产工艺和条件。包括灭菌方法和条件，生产方式(连续、批 式、半连续)，生产周期，生产能力，工艺控制条件及方式等； （4）初始物料的物理、化学和生物学特性。包括产物浓度、主要杂质 种类和浓度、盐的种类和浓度、溶解度、pH、粘度、流体力学性 质和热力学性质等。 精选编制 一、建立分离纯化工艺需了解的各种因素 2. 物料中杂质种类和性质 物料中杂质种类和性质包括相关性和非相关性杂质的含量、 化学性质、结构、相对分子质量、电荷性质及数量、生物学特性、 稳定性(对热、pH、盐、有机溶剂等)、溶解度、分配系数、挥发性 及吸附性能等。 精选编制 二、建立分离纯化工艺需了解的各种因素 3. 目的产物的特性 目的产物特性主要有产物的化学、物理和生物学特性。 包括化学组成、相对分子质量、等电点、电荷分布及密度、溶解度、稳定性(对热、冷冻、pH、盐、有