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固相萃取-高效液相色谱法测定烟草中两种多羟基吡嗪异构体 一些重要的卷烟化合物对香烟的外观质量有很大影响。 其中的脱氧果糖吡嗪 (DOF) 是Maillard反应的中间产物之一, 它与卷烟特别是混合型卷烟的烟香密切相关, 受到人们越来越多的关注 本文报道了一种可靠的测定烟草中DOF的分析方法。 该方法用固相萃取小柱预分离, 选择Waters Carbohydrate Analysis色谱柱, 高效液相色谱分离、 测定2, 5-DOF和2, 6-DOF两种异构体。 并初步测定了不同卷烟中的DOF量。 1 1.1 超声提取设备和仪器 Agilent1100液相色谱仪 (美国Agilent公司) , 配备DAD二极管阵列检测器, G1322A在线脱气机, G1311四元泵, 自动进样器, HP Chemstation化学工作站 (美国惠普公司) , G1316A恒温箱; 250 mL索氏萃取仪; 通用研磨器 (德国Christion公司) ; KQ2200E型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) ; PG503-S电子天平 (感量0.001 g, 瑞士METTLER公司) ; AE240电子天平 (感量0.00001 g, 瑞士METTLER公司) ; Agilent SPE真空提取装置。 无水甲醇、 乙腈 (HPLC级, JK Chemical Ltd.) ; 2, 5-DOF、 2, 6-DOF (云南烟草研究院提供) ; 二次蒸馏水 (Milli-Q50超纯水仪处理, 电阻率≥18.0 MΩ·cm) ; 成品烟烟丝 (红塔集团玉溪卷烟厂提供) 。 1.2 1.2.1 萃取溶剂的选择 取烟草样品30 g, 用研磨机粉碎, 过孔径0.074 mm筛, 称取2.500 g烟末, 加入100 mL无水甲醇, 索氏萃取2 h。 用5 mL甲醇和5 mL超纯水以10 mL/min的流速依次冲洗Waters Sep-Park-C 采用与标样的保留时间和色谱图对比法定性, 外标法定量。 1.2.2 rbohirateanalysis柱3.3.3m 色谱柱: Waters Carbohydrate Analysis柱 (3.9 mm×300 mm) ; 流动相: 2 2.1 色谱条件选择 将DOF与烟草提取物中的其它化学成分分离的同时, 还要将结构相似、 极性相近、 难于基线分离的DOF的2个异构体分离。 选择几种C 在分离条件的选择过程中, 以下两点对结构相似、 极性相近的DOF 2个异构体的分离有一定的影响: ① 分离的色谱柱。 C 从紫外二极管阵列检测器在190～400 nm波长范围内对2种DOF 异构体标样的扫描光谱图中发现, 2个异构体的最大吸收波长均为275 nm, 故选择在275 nm波长下提取色谱图。 2.2 萃取剂的选择 为有效萃取烟草样品中的DOF, 分别以甲醇和水为溶剂, 在相同条件下进行索氏萃取对比试验。 结果显示, 以水作萃取剂, DOF的2个异构体基线分离差, 而且其3次重复萃取的RSD大于5%, 可能是由于水的极性较大, 导致其萃取的强极性物质的种类和数量较多, 从而干扰了DOF的分离。 而用甲醇作萃取剂, 在同一条件下, 其对DOF两种异构体进行萃取的萃取量均大于水, 而且其RSD小于2%, 甲醇萃取液的颜色比水萃取液的淡, 色素少, 便于处理。 因而, 选择甲醇作萃取剂。 实验中又发现, 用甲醇提取DOF, 若提取液未经C 2.3 混合标准溶液的配制 准确称取2, 5-DOF 和2, 6-DOF各0.0500 g, 置于250 mL容量瓶中, 用甲醇溶解并定容, 摇匀, 得200 μg/mL的混合标样标准贮备液。 准确移取标准贮备液各0.25、 0.5、 2.5、 5、 10、 20、 40、 50 mL, 分别置于100 mL容量瓶中, 用甲醇定容, 摇匀, 得到0.5、 1、 5、 10、 20、 40、 80和100 μg/mL系列标准溶液。 对各标准溶液进行HPLC分析, 并以峰面积 ( 2.4 dof回收率 准确称取相同烟样2.50 g 9份, 其中1份为基准, 加入100 mL甲醇, 另8份均加入2, 5-DOF 与2, 6-DOF各为12和6 μg/mL的甲醇混合标准溶液100 mL, 分别进行前处理和DOF的测定, 并通过DOF的测定值、 加入量和测得量计算其回收率 (表2) 。 由表2可知, 2种DOF的回收率均分别为98%和104%, 本法比较准确。 可能是因为索氏萃取时, DOF的极性大、 沸点高, 挥发损失小, 而且用固相C 2.5 卷烟中离子烟种的dof用量 采用本法测定了红塔集团技术中心提供的市场上销售的8种国内外卷烟样品中的DOF, 每种烟样平行做3个样后取其平均值。