T7启动子介导体外构建Nucleostemin特异性短发夹状干扰RNA.pdf

中国药理学通报 　Ch inese P ha rm acolog ica l B u lletin　2006 Jun; 22 ( 6) : 73 1～5 7·31 · T7启动子介导体外构建 Nucleostem in特异性短发夹状干扰 RNA 1, 2 2 3 3 3 1 1 2 岳保红 ,朱晓燕 ,孙 　玲 ,赵小强 ,陈艳丽 ,王清霞 ,刘 　帅 ,张钦宪 (郑州大学 1. 第一附属医院检验科 、郑州大学医学检验系 , 2. 基础医学院 组织胚胎学教研室 , 3. 第一附属医院血液科 ,河南 郑州 　450052) 中国图书分类 号 : R 32924; R 342 2; R 3943; R 394 2; 老的进化保守机制 ,在抵抗病毒感染 、内生性的基因 R 733705 突变和抑制 内源性转座子移动方面发挥作用 [ 1 ] 。 文献标识码 : A 文章编号 : 100 1 - 1978 (2006) 06 - 073 1 - 05 在哺乳动物细胞中 RNA i能高效特异地阻抑特定基 摘要 : 目的　体外构建合成针对 N ucleo stem in (核干细胞因 因的表达 。与 RNA 反义技术相比, RNA i抑制效率 ) ( ) 子 ,N S 基因的短发夹状干扰 RNA shRNA ,用于进一步研 更高 ,作用时间长而稳定 ,操作简单 。现在 RNA i技 ( ) 究以该基因为靶 目标 、RNA 干扰 RNA interference, RNA i 为 术的应用已成为研究、分析生物体某一特定基因功 手段的白血病基因治疗可行性 。方法 　从 N ucleo stem in 基 因的三个变异体 cDNA 共同序列中筛选出 2个 3 端′为 AA 的 能的强有力的工具 [ 2 ] ,并且有望成为一种新的基因 2 1个碱基片段作为 shRNA 合成的对应序列 , 9 个碱基的 5 ′ 阻断和基因治疗的途径 ,特别是治疗某些特定蛋白 UCUCUU GAA 3 作′为 Loop 环 。以 23 个碱基 的 5 ′GGA TC 质过量表达相关的疾病 ,如恶性肿瘤 。大多数恶性 ( ) CTAA TACGACTCACTA TA 3 作′为 T7启动子 T7 Promoter 序 肿瘤存在相关的基因突变或过表达 ,是恶性肿瘤病 列 ,构建 shRNA 的体外合成双链 DNA 模板 ,一条链 5 端′无 程中的一个重要环节 。N ucleo stem in (核干细胞 因 AA ,顺序为启动子 、shRNA 正义信息链 、Loop 环 、shRNA 反义 ) 子 ,N S 基因在 2002 年被发现 ,其表达产物 N S蛋白 信息链 ,共 70 个碱基 ; 另一条是该链 的互补链 , 5 ′端带有 集中于细胞核内, 已有的研究显示其可能参与调控 ( ) AA ,共 72个碱基 。在 T7 RNA 聚合酶 T7 RNA po lym era se