抗原冲击树突状细胞介导CTL特异性抗白血病作用的体外研究.pdf

摘要 摘要 目的：研究白血病患者骨髓来源的单个核细胞体外诱导为树突状细胞的有 效方法；观察不同途径来源的白血病抗原冲击树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴 细胞特异性的抗白血病效应，为急性髓性白血病免疫治疗提供理论依据。 方法：lo例急性髓性白血病患者骨髓经淋巴细胞分离液分离单个核细胞， 天诱导分化为树突状细胞；分别用弱酸洗脱法提取单个核细胞MHC。I类抗原肽 以及用0．4％KClf氐渗法提取的白血病抗原，冲击树突状细胞，形成负载抗原的 AML．DC；抗原与树突状细胞共培养6天后与正常人外周血分离的、经IL．2培 养的T细胞共同培养，生成特异的细胞毒性T淋巴细胞；采用四甲基偶氮唑盐 比色法(MTT法)比较不同方法产生的CTL细胞对急性髓性白血病细胞的杀伤 活性。用倒置显微镜观察AML．DC诱导前后形态学变化，用流式细胞仪检测急 表达。 结果：白血病患者骨髓来源的单个核细胞经过100ng／mlGM．CSF、500ng／ml 钙离子载体A23187成功诱导为树突状细胞，倒置显微镜下观察具有典型的树突 诱导后48h最高，达59．69+2．56％，较诱导前差别有统计学意义，以后逐渐降低， CDla则在96h达最高，较诱导前明显升高，有统计学意义；弱酸洗脱法获得的 抗原肽冲击树突状细胞致敏T细胞后杀伤白血病细胞的能力最高，为 76．654-12．62％，未负载抗原的树突状细胞致敏T细胞后杀伤白血病细胞的能力 10．274-2．84％。 结论：急性髓性白血病患者来源的骨髓单个核细胞经GM—CSF、钙离子载体 A23187能够成功诱导为树突状细胞；弱酸洗脱法获得的抗原肽冲击树突状细胞 致敏T细胞能够获得更强的杀伤白血病细胞的能力。 关键词：白血病；树突状细胞；细胞毒性T淋巴细胞；钙离子载体 II Abstract ABSTRACT effectivemethodforcultureofthedendriticcells the Objective：Toexplore ofacute leukemiaandthe frombonemarrowmononuclearcell myelocyticpatient with mediateddendriticcells acute anti-leukemiccelleffect by pulsed specific ofAML leukemiainvitroandto atheoreticbasis antigen provide myelogenous immunotherapy． with Method：Bonemarrowmononuclearcellsisolated separation lymphocytes culturedwithrecombinate mediumfrom10casesofAML were patients