水稻rbcS启动子的克隆及其在转基因水稻中的特异性表达.doc

水稻rbcS启动子的克隆及其在转基因水稻中的特异性表达 第35卷第1期 2007年1月 西北农林科技大学(自然科学版) JournalofNorthwestAamp;FUniversity(Nat.Sci.Ed.) VoI.35No.1 Jan.2007 水稻rbcS启动子的克隆及其在转基因 水稻中的特异性表达 卢碧霞,张改生,夏勉.,马守才 (1西北农林科技大学农学院.陕西杨凌712100; 2国家作物分子设计中心,北京100085) [摘要]为将高效特异的启动子用于转基因水稻研究,利用PCR技术从水稻’中花1t’基因组DNA中克隆 了rbcS启动子,序列分析表明,扩增片段(2746bp)与已报道的该基因序列相应区域的同源性达99.2.将rbcS 启动子与GUS报告基因融合构建了由rbcS启动子引导GUS基因的植物表达载体,经农杆菌介导法导人到水稻 中.对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量测定结果表明,rbcS启动子可驱动GUS报告基因在转基因水稻 植株叶片中的特异性表达,其表达水平高于CaMV35S组成型启动子.而在转基因水稻植株根和种子等器官中不 表达或表达活性极弱,表现出明显的组织特异性. [关键词]水稻rbcS启动子;转基因水稻;基因表达IGUS活性 [中图分类号]Q74[文献标识码]A[文章编号2007)01—009605 Cloningofthepromoterofricerbc$and itsspecificexpressionintransgenicrice LUBi—xia～,ZHANGGai—sheng,XIAMian,MAShou—cai (1CollegeofAgronomy.NorthwestAamp;.FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China; 2NationalCentrerMolecularCropDesign,Beijing100085?China) bstract:Tousespecificexpressionofforeigngenesofpromotersintransgenicriceresearch,therice rbcSpromoterwasisolatedfromthericeofZhongHua11genomicDNAbyPCR,anditssequencingindicat— edthattheamplifiedband(2746bp)was99.2homologoustothereportedonesatthecorrespondentse— quenceregions.TheclonedrbcSpromoterwasfusedtOthe5r_upstreamofGUS(beta—glucuronidase)cod— ingregioninabinaryvector,andintroducedintoricebyAgrogacterium—mediatedtransformation.Theinte— grationoftherbcS—GUSfusiongeneintransgenicricewasconfirmedbyPCRanalysis.Thedeterminations oftheGUSactivitiesinthetransgenicriceplantsindicatedrbcSpromotercoulddrivetheGUSreporter genetOexpressintheleavesoftransgenicriceplantswhileexertingnoorveryweakinfluenceontheex— pressionoftheGUSreportergene,andtheexpressionlevelofrbcS—GUSfusiongenewassignificantly strongerthantheexpressionlevelofCaMV35S—GUSfusiongene.SorbcSpromoterwastissuespecificin itsexpression. Keywords:ricerbcSpromoter;transgenicrice;geneexpression;GUSactivity 基因的表达和调控是植物基因工程研究的主要 内容,外源基因表达量不足是不能获得理想的转基 因植物的重要原因.启动子在决定基因表达方面起 着关键作用,因此,选择合适的植物启动子是增强外 [收稿日期]2006—0615 [基金项目]国家科技部”863”重大专项(20O2AA2070O4)l国家科技部”863”项目(2002AA2ClOO1) [作者简介]卢碧霞(1969一),女,陕西