应斌武教授-结核病的分诊断技术进展.pdf

结核病的分子诊断技术进展 应斌武 四川大学华西医院 2017.12 广西南宁 01 结核的流行现状 02 结核的分子生物学诊断 03 诊断技术发展的多元化 04 华西医院的结核病诊断 的临床应用与研究进展 一、结核流行病学现状 预计未来20年将有3600万人死于结核病， 结核病为感染性疾病中的头号杀手。 传统检测方法 特点：操作简便、快速、价廉。特异 性好，阳性率低，易造成漏诊。 涂片 特点：提高了镜检的灵敏度，缩短了检 测时间；缺点是假阳性率较高，需确证 方法（萋-纳染色） Sputum 固体培养及药敏试验—孵育4 周观察生长情况 平均时间2-3个月 培养 液体培养及药敏试验 平均时间20天 数小时，快速简便， 分子生物学 相对传统方法更灵敏 二、结核的分子生物学诊断 分子诊断 RNA 水平 DNA 水平 蛋白质水平 恒温扩增 变温扩增 IGRA, TST 等 扩 增 杂 交 SAT,TMA FISH, 探针 鉴 定 鉴定+耐药 LAMP, RT-PCR, SDA LPA, Xpert, HRM, 测序 RNA作为分子诊断靶标的技术 1. Gen Probe MTD （TMA技术） 原理：以rRNA为靶标 ，采用线性探针技术检测 结核分枝杆菌复合群 检测时间: 2.5h  扩增 rRNA ，TMA恒温扩增  动力快速反应，30分钟产生十亿扩增物  反应在单一试管进行，无须移液和清洗