结核病实验室诊断技术新进展 (2).ppt

交叉引物法 * 检测原理 取痰液或支气管冲洗液等临床标本，经液化处理、煮沸离心提取DNA模板，用交叉引物扩增技术（CPA）在63℃恒温下完成结核分枝杆菌DNA的扩增和杂交，然后在密闭的一次性核酸检测装置中用免疫层析乳胶标记试纸条定性检测扩增产物。 * 试剂盒A（小盒） CPA玻璃化试剂 DNA提取液 ddH2O(阴性对照) 阳性对照 复溶缓冲液 石蜡油 试剂盒B（大盒） 一次性核酸检测装置 备用液泡 结核分枝杆菌(TB)核酸检测试剂盒 （恒温扩增-试纸条法） * 检测流程 恒温金属浴 1.核酸提取 2.恒温扩增 3.快速检测 * 结果的判读 阳性：试纸条出现两条红色条带，一条位于质控区（C线），一条位于检测区（T线）。表明样本中含有结核分枝杆菌，且其水平达到或超过本试剂盒的最低检出限； 阴性：试纸条质控区（C线）出现一条红色条带。检测区（T线）没有条带。表明样本中不含结核分枝杆菌，或其水平低于本试剂盒的最低检出限。 无效：试纸条质控区（C线）未出现条带。表明试剂盒已损坏、失效或者操作有误。 * 结论 用于初诊患者初筛 良好的检测效能， 时间短、无仪器、灵敏度特异性高 用于涂阴肺结核患者检测 显著提高对涂阴肺结核患者的检出率 * RNA等温扩增法 将新一代的核酸恒温扩增技术和实时荧光检测技术相结合的一种新型核酸检测技术（SAT技术）。 特异性检测结核分枝杆菌16S rRNA，同时采用了新型的超声破碎结核分枝杆菌的方法，准确、快速地提供结核病的诊断依据。 * * 特点1.准确? ?高灵敏度: 阳性检出率高于涂片、固体培养、液体培养。? ? ? ? ? ? ?准确度高于“金标准”固体培养。?? ?高特异性: 97.85%~100%。2.快速、简便? ?2小时? 超声波处理结核菌，操作更为简单，易掌握。3.活菌检测----为临床的治疗效果提供参考依据? ?核糖体RNA（rRNA）是结核分枝杆菌活菌的标志。 * 意义： 阴性的意义： ①表示未受结核菌感染。 ②某些情况下不排除已受结核菌感染，如变态反应前期；患急性传染病、发热、使用免疫抑制剂等；免疫功能低下如重症结核病、慢性消耗性疾病、肿瘤、艾滋病、高龄等。阴性也不表示没有结核感染。值得注意的是假阴性情况，在临床上有感染结核的确切依据而患者PPD试验却阴性，这种情况常见于以下疾病：初次感染结核菌4～8周以内、重度营养不良、恶性肿瘤、机体免疫缺陷性疾病（先天性免疫缺陷症、艾滋病）、免疫抑制剂使用者等，个别老年人因机体变态反应功能低下也常呈阴性反应。婴幼儿PPD试验阴性应该及时接种卡介苗。 阳性的意义：阳性表示曾感染结核， 不一定现在患病。 1．一般阳性和中度阳性： ①结核病现症患者。 ②已受结核菌感染但并不意味着发病或患病。 ③卡介苗接种所致变态反应。 ④3岁内未接种卡介苗者提示体内存在结核病灶, 应及时进行结核菌检查、影像学检查、血沉等检查以确定诊断和治疗。 2．强阳性： （1）结核病患者。 （2）感染结核菌未发病者。强阳性人群结核病的发病率高，在未找到病变时可作预防性治疗。 3．如果2年内PPD试验结果由阴性（-）转为阳性（+），或反应强度从原来硬结直径10mm增至10mm，提示新近感染过结核菌，或可能存在活动性病灶。 预防性抗痨治疗的适应证： 1、新感染的个体，特别是5岁以下的婴幼儿或青春期且PPD试验强阳性者； 2、与传染性结核病患者有密切接触者，且PPD试验阳性（特别是强阳性）的少年和儿童； 3、与传染性结核病患者有密切接触的5岁以下、特别是新生儿，虽PPD试验阴性，亦建议用3个月INH进行预防感染的治疗。 PPD结果的判定： 阴性：硬结平均直径＜5mm或无反应者为阴性 一般阳性：硬结平均直径5mm～9mm 中度阳性：硬结平均直径10mm～19mm 强阳性：硬结平均直径≥20mm（儿童≥15mm）或局部出现水泡、坏死及淋巴管炎者 * * * * * * * * * * 产品组成包括两个盒子，一个小盒A盒，一个大盒B盒，运输都是常温运输，如果要长期保存，那A盒需要冷冻保存。 * 非常简单的三个步骤，提取、扩增、检测，最后检测是通过试纸条很直观的读取，一条线就阴性，两条线就阳性。检测装置是一次性的，可以有效地防止交叉污染引起的假阳性。 * 这就是三种结果的判读，两条线，C线（质控线）和T线（检测线）都出来的时候就是阳性，这里说明一下还有一种情况，就是T线出来而C线没出来，也是判读为阳性，因为反应体系是有两套系统，两套反应对于显色的乳胶颗粒