《目的基因分离克隆》.pdf

1.目的基因别离克隆

1.目的基因别离克隆

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一目的基因的化学合成

一目的基因的化学合成

•特点：3’→5’合成，合成长度200bp

•过程：推出基因序列后，用DNA合成仪合成

•作用：合成引

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二PCR合成目的基因

二PCR合成目的基因

•定义：别离纯化出的目的片段用PCR仪扩增

•〔详见主要技术〕

•引物设计原那么

•长度：15-30bp

•退火温度：

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序列：少相似，防错配

引物3’末端：防止为A〔易错配〕

CG含量：40%-60%

※未知序列时：用近缘生物对应片段参考

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•RT-PCR间接合成：以mRNA为模板逆转录出

cDNA，再以cDNA为模板

PCR

※cDNA：

定义：以mRNA为模板逆转录合成的无内含子

单链环状DNA

特点：无内含子、单链环状，逆转录酶属于

DNA聚合酶，需引物

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三基因文库别离目的基因

三基因文库别离目的基因

•基因组文库的建立：

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•cDNA文库的建立：

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四基因图位克隆

四基因图位克隆

•染色体步移法：

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•染色体登陆：

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※本章总结

※本章总结

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