几种酶的测定方法.pdf

太上有立德，其次有立功，其次有立言，虽久不废，此谓不朽。——《左传》

各种酶的测定方法:

土壤脲酶测定方法（

靛酚比色法）

根据脉酶水解时生成的氨与苯酚钠及次氯酸钠反应，形成兰色靛酚这一原理。

试剂配制：

1.甲苯（分析纯）

尿素：尿素（分析纯）克溶于毫升蒸馏水中。当天做当天配

2.10%10100（）

3.柠檬酸盐缓冲液：368克柠檬酸（分析纯）溶于600毫升蒸馏水中；295克氢氧化

钾溶于水；将二种溶液合并，调至，并用水稀释至升。

pH6.72

苯酚钠溶液：克苯酚溶于少量乙醇，加毫升甲醇和毫升丙酮，

4.A.62.595%218.5

用乙醇稀释至100毫升。B.27克氢氧化钠溶于100毫升水中。将二溶液保存在冰

箱里。使用前，将溶液、各吸取毫升混合，用蒸馏水稀释至毫升。

AB20100

5.次氯酸钠溶液：用蒸馏水稀释试剂，至活性氯浓度为0.9%。（次氯酸钠活性氯

浓度为5.2%）。

标准溶液：

称克硫酸铵（烘干）溶于水，稀释至升（毫升含微克

0.4717105°C11100

氮）即100ppm。

将的标准溶液稀释为。分别吸取、、、、

100ppm10ppm00.5ml1.5ml2.5ml

、、、、于毫升容量瓶或刻度试管中，加入试剂，最

3.5ml4.5ml5.5ml6.5ml7.5ml50

后定容至毫升使溶液浓度为：、、、、、、

5000.1ppm0.3ppm0.5ppm0.7ppm0.9ppm

1.1ppm、1.3ppm、1.5ppm。

分析步骤：

称2~5克过20目风十土于50毫升磨口三角瓶中，加5~10滴甲苯，盖好，15分

钟后加10毫升10%尿素和20毫升pH6.7柠檬酸盐缓冲液，摇匀后，在30C恒温箱中

培养24小时，过滤。取滤液1~3毫升（视样品浓度定）于50毫升刻度试管中，加入

4毫升苯酚钠溶液和3毫升次氯酸钠溶液，边加边摇匀。20分钟后定容，在分光光

度计波长578nm处比色（1cm比色杯）。反应生成的靛酚兰能在60分钟以内稳定。

每一土样设置用水代替基质（即尿素）的对照，以除掉土壤中氨态氮引起的误差。

还需减去无土基质（尿素+柠檬酸盐）。

结果计算