SODPODCATMDA的测定方法.doc

缩写：SOD：超氧化物歧化酶； CAT：过氧化氢酶； POD：过氧化物酶； MDA：丙二醛；PVP：聚乙烯吡咯烷铜K-30；L-Met：甲硫氨酸； NBT：氮蓝四唑；TBA：硫代巴比妥酸；TCA：三氯乙酸；PBS: 磷酸缓冲液 SOD的测定方法 加样顺序：（V=3ml）磷酸缓冲液：1.5ml L-Met: 0.3ml NBT: 0.3ml EDTA-Na2: 0.3ml 核黄素：0.3ml 酶液：0.05ml 蒸馏水：0.25ml 试剂配制： (1) 0.05mol/L PBS：pH7.8 (2) 130mmol/L L-Met: 1.9399g Met用PBS定容至100ml (3) 750mmol/L NBT: 0.06133g用PBS定容至100ml(避光保存) (4) 100umol/L EDTA-Na2: 0.03721g用PBS定容至1000ml (5) 20umol/L核黄素: 0.0753g用蒸馏水定容至1000ml(避光保存) 注：（1）对照：以加缓冲液、不照光为空白；照光的为最大还原管 (2) 照光后至显蓝色要立即避光放置、迅速测定A560值 2.MDA的测定方法 试剂配制： （1）5% TCA： 5g用蒸馏水定容至500ml （2）0.5% TBA：2.5g用TCA定容至500ml 方法： 酶液1ml—3ml0.5%TBA和5%TCA—混合后在100度水浴煮沸15min—迅速冷却，10000r/min离心10min—用蒸馏水调零分别测定上清液在532nm、600nm处的吸收值 3.POD的测定方法 试剂配制： （1）0.1mol/L的醋酸缓冲液：8.8mlA+41.2mlB得到100mlph5.4的醋酸缓冲液 A(0.2mmol/L的HAc溶液)—6ml冰醋酸溶到494ml蒸馏水中 B(0.2mmol/L的NaAc溶液)—13.6gNaAc.3H2O （2）0.25%愈创木酚溶液—125um愈创木酚溶于50ml 50%乙醇中（临用前配制） （3）0.75%H2O2溶液：1.25ml 30% H2O2定容至50ml（临用前配制） 方法：比色杯中依次加入2ml 0.1mol/L的醋酸缓冲液—1ml 0.25%愈创木酚溶液—xml酶液（5min值为500-800即可）—0.1ml 0.75%H2O2溶液—迅速巅到混匀把A460调零并开始计时—1次/30s,连续读取3min 4.CAT的测定方法 试剂配制： (1) 50mmol/L的PBS（pH7.0）7.0）7.0）