几种茶多酚测定方法的比..doc

几种茶多酚测定方法的比较 陈惠衡 施 玲 （湖南农业大学 长沙 410128） 摘要 用几种不同的测定方法，对不同种茶叶原料提取物中多酚的测定结果进行了比较，提出了几种测定方法之间的差异和规律。 关键词 茶多酚、酒石酸铁法、Folin—Denis、HPLC法 茶多酚是茶叶中的主要有效成分，茶中多酚含量的多少，可以反映出茶叶品质的优劣。测定茶多酚的方法很多，但我们所常用的方法有酒石酸铁法和菲林试剂法，特别是前者，以其快速简便，容易掌握重现性好而经常使用。但是在实验过程中，笔者发现，茶的品种不同，用不同的方法测定出来的多酚结果也不同，并且从大量的分析数据中找出了其中的规律。 实验材料与方法 1.1 仪器与材料 高效液相色谱（美国Beckman公司） 754紫外－可见分光光度计（上海分析仪器厂） 金农公司生产的速溶绿茶、儿茶素 1.2 实验方法 1.2.1 酒石酸铁法 见GB 8313－87 1.2.2 Folin－Denis法 1.2.2.1 原理：Folin试剂能氧化茶多酚和其它还原性物质并显色。 1.2.2.2 试剂：15%碳酸钠 菲林试剂 1.2.2.3 实验步骤： （1） 绘制标准曲线：吸取标准单宁酸溶液0－10ml一组，分别置于100ml容量瓶中。各加水75ml，Folin试剂5ml，15％碳酸钠溶液10ml，加水定容至刻度，混匀。在30℃条件下，恒温反应30min，于波长760nm处测定吸光度，计算出线性回归方程。 （2） 样品的测定：精确称取40.00－120.00mg（视样品的含量多少而定），加水溶解后定容至100ml。取1ml试液置于100ml容量瓶中，以下步骤同标准曲线绘制。测定吸光度。利用回归方程计算含量。 （3） 实验注意事项：实验过程中温度和时间对其结果有较大影响，必须恒温、定时。 1.2.3 儿茶素的HPLC分析 样品制备： a: 精确称取30mg儿茶素样品于50ml容量瓶中，用水稀释，超声5min，冷却定容； b: 0.45um超滤膜处理后待分析； 1.2.4 仪器：美国Beckman公司生产的HPLC，126泵，168检测器 1.2.5 色谱条件： 色谱柱ODS4.6× 200mm，5um 波长：278cm 流速：1.3ml/min 柱温：30℃ 进样量：10ul 流动相：A水；B N，N－二甲基甲酰胺:甲醇:醋酸＝40:2:1 梯度洗脱： 流动相 时 间（min） 0.0 5.0 10 24 A(％) 81.0 79.5 73.5 81.0 B(％) 19.0 20.5 26.5 19.0 2．实验结果与讨论 2．1 按不同的大小叶种配比所生产的速溶绿茶及茶多酚测定结果见表一。 表一：不同品种各种拼配比例的茶多酚含量 品种拼配比例 多酚含量（％） 桃源小叶种％:云南大叶种％ 酒石酸铁法 菲林试剂法 100 : 0 58.98 49.10 90 : 10 58.80 49.90 75 : 25 58.03 52.34 50 : 50 57.21 55.88 0 : 100 55.09 58.72 益阳秀眉小叶种％:云南大叶种％ 酒石酸铁法 菲林试剂法 100 : 0 56.41 43.25 80 : 20 55.29 45.08 60 : 40 54.35 47.83 40 : 60 53.16 49.31 20 : 80 52.30 51.78 0 : 100 51.14 53.35 从表一的实验数据不难看出，随着大叶种原料比例的增加，菲林试剂法测定的多酚数据逐渐增加，而酒石酸法测定得的多酚数据则逐渐减少。反之亦然。那么为什么会出现这种规律呢？我们可从以下大小叶种原料生产的绿茶及儿茶素的HPLC图谱中儿茶素组成的差异来说明问题。见图1-4及表二。 2．2 绿茶、儿茶素的HPLC图谱 小叶种绿茶图谱 图1 大叶种绿茶图谱 图2 小叶种儿茶素图谱 图3 大叶种儿茶素图谱 图4 表二：不同产品儿茶素组分的含量 品 种 组分（％） EGC DL－C EC EGCG GCG ECG 小叶绿茶 5.0239 1.1545 3.6002 11.3448 0.5101 5.1203 大叶绿茶 4.0791 4.9437 7.3012 7.3609 0.0608 8.5