AccQ-Tag氨基酸分析方法-普通C18柱.pdf

AccQ·Tag氨基酸分析方法氨基酸分析方法 氨基酸分析方法氨基酸分析方法 氨基酸分析的特点氨基酸分析的特点 氨基酸分析的特点氨基酸分析的特点 ❀ 多数氨基酸没有“显色基团” ✎无法用简单的方法检测 ❀ 所有的氨基酸极性都很大,无法反相分离 RCH (N + H 3 )COO− ❀ 需要进行处理：“衍生” ✎增加显色基团，提高检测灵敏度 ✎ 改变样品的极性，改变分离模式 氨基酸样品衍生的目的氨基酸样品衍生的目的 氨基酸样品衍生的目的氨基酸样品衍生的目的 ❀ 提高检测的灵敏度 ✎增加紫外基团以增强紫外检测的灵敏度 ✎增加荧光基团以便使用高灵敏度荧光检测器 ❀ 改变分离的选择性 ✎ 改变组份的基团，如： ➠ 变离子型化合物为非离子型，用反相方法分离 什么是什么是AccQ·Tag方法？方法？ 什么是什么是 方法方法？？ ❀ AccQ·Tag方法是一种用于肽及蛋白质水解氨基 酸分析的柱前衍生技术 ❀ AccQ·Tag方法的内容包括 : ✎用Waters 的AccQ·Fluor™衍生试剂(AQC)衍 生氨基酸 ✎用反相HPLC分离衍生产物 ✎用荧光或紫外检测器定量检测衍生产物 AccQ·Tag方法的基础方法的基础 方法的基础方法的基础 ❀ AccQ·Tag方法的基础在于专为氨基酸分析而开 发的衍生试剂-AQC (6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀 酰亚氨基氨基甲酸酯) ❀ AQC是含N-羟基琥珀酰亚氨基的活性杂环氨基 甲酸酯,它是一种新型氨基衍生化试剂,结构如 下 : H O N O N N O O AQC衍生试剂 AccQ·Tag方法对仪器的要求方法对仪器的要求 方法对仪器的要求方法对仪器的要求 ❀ 一套Waters HPLC 梯度系统 : ✎2690(含脱气装置和柱温箱)-2487和/或474检测器 _M32色谱管理系统 ✎600_在线脱气机_柱温箱_717(或7725i)_2487和/或 474_M32色谱管理系统 ✎515×2_PCM_Mixer_柱温箱_TCM_717(或7725i)_2487 和/或474_M32色谱管理系统 ❀ 若非Waters 的HPLC系统,则由于泵精度和仪器 系统体积等原因,可能得不到满意的分析结果 AccQ·Tag方法所需的辅助设备方法所需的辅助设备 方法所需的辅助设备方法所需的辅助设备 ❀ 衍生用 : ✎涡旋搅拌器 ✎微量移液器 (1-100µl) ✎烘箱 (可恒温至55℃) ❀ 配制流动相用 : ✎超声波清洗器 ✎pH计 (精确到0.01) ✎溶剂过滤装置 ✎100ml和1000ml量筒 ✎500ml或1000ml烧杯 ✎纯水器 (可制备18M Ω无有机污染物之高纯水) AccQ·Tag方法必需化学品方法必需化学品 方法必需化学品方法必需化学品 ❀ 一套Waters AccQ·Tag 化学组件包,包括 : ✎Waters AccQ ·Fluor 试剂盒试剂盒- 含有下述三种试剂各5瓶∶