氨基酸分析方法通则.pdf

MV_RR_CNJ_0019 氨基酸分析方法通则 1. 氨基酸分析方法通则的说明 编号 JY/T 019—1996 名称 (中文) 氨基酸分析方法通则 (英文) General rules for amino acid analysis 归口单位 国家教育委员会 起草单位 国家教育委员会 主要起草人 李 聪 刘子列 批准日期 1997 年 1 月 22 日 实施日期 1997 年 4 月 1 日 替代规程号 无 适用范围 本方法适用于异硫氰酸苯酯柱前衍生法定性、定量测定样品中水 解氨基酸、游离氨基酸以及不常见的氨基酸。 主要技术要求 1.定义 2.方法原理 3.试剂和材料 4.仪器 5.样品 6.分析步骤 7.分析结果的表述 是否分级 无 检定周期(年) 附录数目 无 出版单位 科学技术文献出版社 检定用标准物质 相关技术文件 备注 2. 氨基酸分析方法通则的摘要 本方法适用于异硫氰酸苯酯柱前衍生法定性、定量测定样品中水解氨基酸、游离氨基酸 以及不常见的氨基酸。 2 定义 2.1 氨基酸 Amino acid 分子内含氨基(亚氨基)和羧基的有机物化合物的总称。根据氨基(亚氨基)与羧基相对位 置的不同，分为α-，β-，γ-，δ-，ω-氨基酸。α-氨基酸是组成蛋白质的基本单位。常 规的氨基酸分析主要指蛋白质水解氨基酸，游离氨基酸的分离测定。 2.2 柱前衍生 Pre-column derivatization 为了提高氨基酸分析的检测灵敏度和分离选择特性，通常采用使氨基酸衍 生化的方法。柱前衍生法，即样品在用分析柱分离前进行衍生化反应，然后 经色谱柱对衍生物进行分离。 2.3 梯度洗脱 Gradient elution 间断地或连续地改变流动相组成或其它操作条件，从而改变色谱洗脱能力的过程。 2.4 基线 Baseline 在正常操作条件下，仅有流动相通过检测器系统时所产生的响应信号曲线。 基线反映仪器的噪音随时间的变化。 2.5 色谱峰 Chromatographic peak 色谱柱流出组分通过检测系统时，所产生的响应信号对时间作图所得的曲 线，曲线的突起部分称为色谱峰。 2.6 峰面积 Peak area 色谱峰所包括的面积。 2.7 保留时间 Retention time 从进样开始到某个组分的色谱峰出现，最大值的时间间隔称为该组分的保留时间，用tR 表示。 2.8 标准样品 Standard sample 作为定性及定量鉴定用的纯物质。PICO-TAGTM氨基酸分析使用的是美国PIERCE生产 的按一定比例混合配制而成的17种水解氨基酸标准液和38种游离氨基酸标准液。 2.9 标准校正曲线 Standard sample calibration curve 用标准样品配制的一系列不同浓度的标准液上机测试后，经计算绘制的作定量分析的标 准曲线。 3 方法原理 采用异硫氰酸苯酯 (PITC) 作为柱前衍生剂。PITC 与氨基酸分子中的氨基(亚氨基)发 生定量的衍生化反应，产生苯基硫代氨甲酰-氨基酸 (PTC-AA) 。过量的PITC通过真空干燥 除去。 衍生产物苯基硫代氨甲酰-氨基酸(PTC-AA)的混合物在色谱柱中随流动相作相对移动 时，混合氨基酸衍生物在两相间进行反复多次的分配。因两相间分配系数不同，使混合组分 达到分离。 由于PITC试剂与氨基酸发生衍生化反应生成PTC-AA ，在氨基酸的结构上引入了苯 环， 使氨基酸的极性降低而有利于反相色