微生物分离技术.ppt

微生物分离技术 一、平板倾注法 2、加样倾注平板 无菌方法，由低浓度开始，从各浓度样品稀释液 中各吸取100ul，均匀地放入已写好稀释度的空白 无菌平皿中，然后在各平皿中加入已经融化并冷却 到45 -50℃的营养琼脂培养基12-15ml，将培养 皿在超净工作台面上轻轻转动，使稀释的菌悬液与 融化的培养基混合均匀，直至培养基凝固。 3、菌落计数 含菌样品的微生物经稀释分离培养后，每一个活菌细胞可在平板上繁殖形成一个肉眼可见的菌落，故可据平板上菌落的数目推算出每克含菌样品中所含的活菌总数（菌落形成数目）。 二、涂布法 样品稀释 倒培养基，制成平板。 凝固后，吸取相应的样品稀释液0.2mL放在平板上。 用灼烧冷却后的无菌玻璃将稀释液在平板表面涂抹均匀。每个浓度做3个平板（重复）。倒置于370C条件下培养1～2d。 三、划线分离法 划线方法 接种环灼烧灭菌、冷却 左手取样品，右手用接种环挑取样品，用已经粘有菌体的接种环于另一新的空白平板中划线 分区划线法：灼烧、冷却、区1划线；灼烧、冷却 区2划线；灼烧、冷却、区3划线；灼烧、冷却、区4划线；完毕、灼烧 连续划线法：灼烧、冷却、取菌，连续划线，完毕、灼烧 平皿划线分离法 思 考 题 平板培养时为什么要把培养皿倒置？ 在划线分离时，为什么每次都需要将接种环上的剩余物烧掉？ * 1、样品作10倍递减稀释至适当浓度 每毫升样品中微生物细胞数= 每皿菌落平均数 × 1/取样体积数 × 稀释倍数 凝固后 28～30℃培养 涂布法流程图 1、挑取单个菌落，分别在平板上做分区和连续划线。 2、37℃培养24-48h检查菌落是否单纯。 3、如不单纯继续按上述方法分离。 *