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食品微生物

基本技能

土壤中微生物的分离纯化技术

一、任务准备

器材与试剂

菌源（土壤）、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板、无菌玻璃涂棒、酒

精灯、稀释液、恒温培养箱、天平、无菌称量纸、药勺、试管架、

记号笔等。

二、知识储备

随着对样品稀释倍数的

增加，稀释液中细菌数

量越来越少，而每一种

个体细菌经培养后形成

单个菌落，菌落又是可

以识别和加以鉴定的。

三、任务流程

菌源→制备梯度稀释液→涂布→培养→挑取单菌落→保存

四、任务实施

1.制备土壤稀释液

称取土样10g，放入盛90mL无菌水并带有玻璃珠的三

角烧瓶中，振摇约20min，使土样与水充分混合，将细

胞分散。用一支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液加入

盛有9mL无菌水的大试管中充分混匀（可使用漩涡振荡

器），然后用无菌吸管从此试管中吸取1mL加入另一盛

有9mL无菌水的试管中，混合均匀。

以此类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀

释度的土壤溶液。

四、任务实施

2.涂布

将3个平板底面分别用记号笔写

上10-4、10-5、10-6三种稀释

度，然后用无菌吸管分别由10-4、

10-5、10-6三管土壤稀释液中各

吸取0.1mL或0.2mL，小心地

滴在对应平板培养基表面中央

位置，再用三角形无菌玻璃涂

棒涂布，使菌液均匀分散在整

个平板表面。

四、任务实施

3.培养

将牛肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温箱中培养1~2d。

四、任务实施

4.挑取菌落纯化

将培养后长出的单个菌落挑取

少许细胞接种到培养基斜面上，

置于37℃温箱中培养1~2d。若接种仪：接种效果图

发现有杂菌，需再一次进行分

离、纯化，直到获得纯培养。

五、实验结果

1.涂布接种法培养基上细菌生长的现象。

2.细菌在培养基上的菌落特性。

记录实验结果，完成实训报告

注意事项

1选择的稀释度应适宜，整个过程注意无菌操作。

十倍稀释时，管尖不能接触下一个稀释度的液面，

2

一个稀释度换一支无菌吸管。

注意事项

涂布时，将菌悬液自平板中央以同心圆方向轻轻向

3

外涂布扩散，使之均匀分布。

涂布后，室温下静置5～10min，使菌液浸入培养

4

基，再进行培养。

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