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微生物的分离与纯化.pdf

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食品微生物

04微生物培养技术

微生物的分离与纯化

生为研究某种微生物特性,或在发酵工业生产中大

物量培养和利用某微生物,须把它们从混杂微生物群体

分中分离出来,获得某一菌株的纯培养物。

与获得只含有某一种或某一株微生物纯培养的过程。

固体培养基分离纯培养单细胞(单孢子)分离

不同微生物在特定培养基上生长用显微分离法从混杂群体中分

形成的菌落或菌苔。离单个细胞以获得纯培养物。

微生物分

离与纯化

液体培养基分离纯培养选择培养分离微生物

一些细胞较大的细菌需要用液设计特定适合环境,从混杂群体

体培养基分离来获得纯培养物。中把该微生物选择培养出来。

一、固体培养基分离纯化

1.稀释平板法

将待分离的材料作一系列稀释,取稀释液少许(约1.0mL)于无菌培养皿中

,倾入己灭菌并冷却至50℃左右琼脂培养基,迅速旋摇混匀。凝固后,倒置

培养,在琼脂平板表面或内部即可出现分散的单个菌落。

一、固体培养基分离纯化

2.涂布平板法

将已熔化并冷却至50℃左右琼脂培养基,制成无菌平板。待冷却凝固后,将

一定量(约0.1mL)稀释度样品悬液滴加在平板表面,再用三角形无菌涂棒

涂布,使菌液均匀分散在整个平板表面,倒置于培养后挑取单个菌落。

一、固体培养基分离纯化

3.平板划线法

先制好无菌培养基平板,用接种环蘸取少量待分离的含菌样品,

在平板表面划线。培养后,在平板表面形成分散单个菌落。

但单个菌落并不一定是由单个细胞形成的,需再划线1~2次,并

结合显微镜检测个体形态特征,可获得真正纯培养物。

一、固体培养基分离纯化

4.稀释摇管法

用于厌氧微生物的分离

固体培养基试管加热熔化,冷却至50℃左右,将待分

离材料梯度稀释,摇匀冷凝后,倾倒灭菌液体和固体

石蜡混合物,培养后,菌落在琼脂柱中间形成。

单挑取和移植菌落,先用灭菌针将石蜡层取出,再用毛细管插入琼脂和管壁间,吹

入无菌无氧气体,吸出琼脂柱,置放于无菌平皿中,用无菌刀将琼脂柱切成薄片进

行观察和菌落的移植。

二、液体培养基分离纯化

稀菌种用一种液体培养基稀释得到一系列稀释度。

释如果稀释后大多数试管中没有微生物生长,那么有微生

法物生长的试管得到的微生物即为纯培养物。

三、单细胞(单孢子)分离微生物

单细胞分离难度与细胞或个体的大小成反比

较大较小

微生物微生物

采用毛细管提取单个个体,转需采用显微操作仪,在显微镜

移清洗,低倍显微镜下进行。油镜下进行。

四、选择培养分离微生物

设计一套特定环境适合该种微生物的生长,能够从

混杂的微生物群体中把该种微生物选择培养出来,

通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术。

增菌培养分离培养

采用选择培养分离

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