基因表达与蛋白质纯化技术探讨.pdf
基因表达与蛋白质纯化
基因表达与蛋白质纯化
技术探讨
技术探讨
复旦大学生物化学系黄伟达
复旦大学生物化学系黄伟达
whuang@fudan.edu2004年5月1日
whuang@fudan.edu2004年5月1日
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内容
内容
•基因表达体系及优劣势
•基因表达体系及优劣势
•大肠杆菌中表达蛋白质
•大肠杆菌中表达蛋白质
•可能碰到的问题
•可能碰到的问题
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基因工程的应用领域
基因工程的应用领域
1.
蛋白质功能研究
1.
蛋白质功能研究
2.
生物制药和疫苗生产
2.
生物制药和疫苗生产
3.
疾病的基因治疗
3.
疾病的基因治疗
4.
食品、化工用酶制剂
4.
食品、化工用酶制剂
5.
抗虫、抗逆植物改进
5.
抗虫、抗逆植物改进
6.
细胞代谢产物的富集
6.
细胞代谢产物的富集
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基因表达体系
基因表达体系
1.
原核体系
1.
原核体系
2.
真核体系
2.
真核体系
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大肠杆菌(Escherichiacoli)
大肠杆菌(Escherichiacoli)
•遗传背景清楚，基因工程操
作方便，商品化表达载体种
类齐全，表达效率高；
•根本不分泌，易形成包含体(
无正确折叠的立体结构)，无
加糖等修饰
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枯草杆菌(Bacillussubtilis)
枯草杆菌(Bacillussubtilis)
•分泌蛋白质能力强，一般有天然
立体结构；
•无加糖修饰功能，培养液中蛋白
酶活性高，重组蛋白易受蛋白酶
的水解；
•质粒不稳定，尚无商品化的表达
载体
.
其他
其他
•乳酸菌(Lacticacidbacteria)
•沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)
•苏云金杆菌
(Bacillusthuringiensis)
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真核细胞表达体系
真核细胞表达体系
酵母细胞
酵母细胞
昆虫细胞
昆虫细胞
哺乳动物细胞/组织
哺乳动物细胞组织
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植物细胞/组织
植物细胞组织
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酵母细胞
酵母细胞
•可生产分泌型蛋白；有天然立体结构，
有加糖修饰功能；可进行染色体