蛋白质纯化.pdf

蛋白质的提取、纯化蛋白质的提取、纯化.doc ? 生物化学研究进展? 作业? ? 题目?????蛋白质的提取、纯化????? ??? 姓名???????????????????学号???????????????????班级???????????????????专业????????????????????? ? 题目：蛋白质的提取、纯化?姓名：??专业：?? 摘??要：本文综述了蛋白质的提取原理及方法，蛋白质纯化的意义、基本原则及方法，蛋白质纯化的前景展望。? 关键词：提取原理?提取方法?水溶液?有机溶剂?双水相萃?纯化?意义?基本原则?方法?溶解度?带电性质?电荷数?配体特异性?前景? 正文：? 1?蛋白质样品的提取?

2017-01-04 约3.49千字 8页立即下载

蛋白质的分离纯化.ppt 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）不连续：浓缩胶和分离胶电泳迁移率决定于所带的净电荷以及分子大小和形状等因素。+凝胶加样P309第31页,共42页，2024年2月25日，星期天巯基乙醇：打开二硫键。SDS：变性剂，破裂蛋白质分子中的氢键和疏水作用。SDS以其氢键与蛋白质分子的侧链结合成复合体。①带有很多负电荷——远远超过蛋白质分子原有电荷②改变了蛋白质单体分子的构象：近似雪茄烟形的长椭圆棒，短轴长度相同，长轴长度随蛋白质的相对分子质量成正比例变化。迁移率主要取决于蛋白质相对分子量SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）第32页,共42页，2024年2月25日，星期天第33页,共42页，202

2024-04-04 约3.33千字 42页立即下载

蛋白质分离纯化.ppt ************************************************蛋白质分子量的测定渗透压法M=CRT/π第55页，共81页，星期日，2025年，2月5日蛋白质分子量的测定超离心法沉降平衡法：样品溶液在分析池中经低速长时间离心，分析池内样品浓度分布达到热力学平衡时，根据分析池内样品的浓度分布可以求算分子量。第56页，共81页，星期日，2025年，2月5日蛋白质分子量的测定凝胶过滤法经验公式：lgM=K1-K2Ve（K1、K2为常数）用几种已知蛋白质，测其Ve，再对lgM作图得标准曲线。再测定未知蛋白质的Ve，可得M。第57页，共81页，星期日，2025年，2月5日

2025-03-08 约1.11万字 81页立即下载

蛋白质纯化技术.ppt 蛋白质纯化的前期准备关于蛋白质我们已知什么？最好的来源？蛋白质纯度要求？活性要求？纯化蛋白的量？如何进行鉴定？纯化时间长短？最终花费？纯化方案？第29页，共83页，星期日，2025年，2月5日1、选择实验材料及预处理选择实验材料物种的选择组织的选择实验材料预处理液体材料过滤离心固体材料洗涤：自来水—蒸馏水—提取缓冲液材料破碎：第30页，共83页，星期日，2025年，2月5日材料破碎机械剪碎研磨反复冻融法超声破碎法高压匀浆法酶解法第31页，共83页，星期日，2025年，2月5日2、蛋白质的提取①提取分离原则尽可能多地提取目的蛋白，同时避免活性丢失（温度过高、pH、有机试剂、金属离子、蛋白酶等因素

2025-02-20 约5.84千字 83页立即下载

蛋白质分离纯化.pptx 第二章蛋白质与其他生物分子旳互相作用;第一节 蛋白质与糖类物质旳互相作用;糖蛋白旳存在;糖蛋白旳生物学功能;研究糖蛋白旳应用;（一）构成糖蛋白糖链旳单糖;;N-连接糖蛋白（1）糖基化位点特异旳氨基酸序列（也称序列子）： Asn–X-Ser/Thr X可以是Pro以外旳任何氨基酸。序列中X位氨基酸旳性质也许与合成旳糖链构造有关;（2）N-连接寡糖旳基本构造;1、高甘露糖型：只具有Man和GlcNAc,并且只有Man 连接在五糖核心区上旳N-糖链。 2.、复杂型：除具有Man和GlcNAc外，尚有Gal、Fuc 和NeuAc旳N-糖链。基本构造是由五糖核心区上加某些可变数目旳N-乙酰氨基乳糖

2025-02-07 约2.18千字 44页立即下载

蛋白质的分离纯化-2.ppt 2.蛋白质的盐溶和盐析　盐溶（salting-in）：低浓度的中性盐可以增加蛋白质的溶解度，这种现象称为蛋白质的盐溶现象。同浓度二价中性盐对蛋白质溶解度的影响比单价中性盐大的多。　盐析（salting-out）：当溶液中的离子强度达到一定的数值时（盐浓度高达一定数值时），蛋白质的溶解度开始下降，很多蛋白质可以从水溶液中析出，这种现象称为盐析。 3.有机溶剂分级分离法与水互溶的有机溶剂（如甲醇、乙醇和丙酮等）能使蛋白质在水中的溶解度显著降低，在室温下，这些有机溶剂不仅能引起蛋白质沉淀，而且伴随着变性。　这种沉淀的主要原因是有机溶剂的加入改变了介质的介电常数。 4.改变温度分离蛋

2017-07-12 约5.79千字 85页立即下载

蛋白质分离、纯化.ppt 一、凝胶层析又叫分子筛层析。分子筛是具有三维空间网状结构的物质，有天然的，也可人工合成。根据网孔不同可制成不同规格。01分子量大的物质不能进入凝胶粒子内部，随洗脱液从凝胶粒子之间的空隙挤落下来，所以大分子物质迁移速度快；02小分子物质要通过凝胶网孔进入凝胶粒子内部，所以小分子物质迁移速度慢。原理：凝胶层析具备条件：1惰性，2水不溶性，3能高度水化。常用分子筛：葡聚糖凝胶（Sephadex）型号：G200、G150、G100、G75、G50、G25、G15分离大蛋白质、小蛋白质，除盐琼脂糖凝胶（瑞典Sepharose、美国Bio-GelA）孔径大，用于分离大分子物质聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel

2025-03-18 约3.26千字 10页立即下载

蛋白质分离纯化.ppt 2.6蛋白质的分离、纯化研究蛋白质的结构、性质和功能，首先需要得到纯的蛋白质样品。(1)蛋白质来源：微生物细胞、动物细胞和植物细胞；(2)随时测定蛋白质活性并检测蛋白质含量。(3)分离和纯化过程都必须在温和的条件下进行。一、蛋白质分离纯化的一般原则生物组织的机械破碎。常用的方法有研磨法、超声波法、冻融法和酶解法等。水溶性蛋白用中性缓冲溶液抽提，酸性蛋白用稀碱性溶液抽提，脂溶性蛋白用表面活性剂抽提等。精制：可用层析法、电泳法等进行精制。根据蛋白质的特性，选择不同的溶剂进行抽提。粗提:离心除去固体杂质后，可通过沉淀法、超滤法、萃取法等处理，得到蛋白质粗制品。成品加工：测定蛋白质的性质并干燥成成品。

2025-03-14 约2.4千字 10页立即下载

蛋白质分离纯化.pptx 研究蛋白质旳构造、性质和功能，首先需要得到纯旳蛋白质样品。 (1)蛋白质起源：微生物细胞、动物细胞和植物细胞； (2)随时测定蛋白质活性并检测蛋白质含量。 (3)分离和纯化过程都必须在温和旳条件下进行。;(1)生物组织旳机械破碎。常用旳措施有研磨法、超声波法、冻融法和酶解法等。 (2)根据蛋白质旳特征，选择不同旳溶剂进行抽提。水溶性蛋白用中性缓冲溶液抽提，酸性蛋白用稀碱性溶液抽提，脂溶性蛋白用表面活性剂抽提等。 (3)粗提:离心除去固体杂质后，可经过沉淀法、超滤法、萃取法等处理，得到蛋白质粗制品。 (4)精制：可用层析法、电泳法等进行精制。 (5)成品加工：测定蛋白质旳性质并干燥成成品。 ;

2024-10-18 约小于1千字 22页立即下载

蛋白质分离纯化.pptx 蛋白质分离纯化;蛋白质分离纯化;样品前处理;蛋白质分离办法;根据蛋白质溶解度差异分离 —沉淀技术可逆沉淀：等电点沉淀、盐析法、有机溶剂沉淀不可逆沉淀：热变性沉淀、重金属盐沉淀、有机酸沉淀;1、根据溶解度不一样;（2）等电点沉淀法1）pH 偏离pI时，蛋白质带相同符号净电荷而互相排斥→蛋白质溶解度大。2）pH = pI时，蛋白质净电荷为0→蛋白质聚集沉淀3）等电点沉淀法缺陷：沉淀不完全。 ;2、根据分子大小不一样;透析——只用于除盐类和小分子杂质;透析——只用于除盐类和小分子杂质;2）超滤（ultrafiltration）：是利用压力和离心力，借助于超

2023-08-22 约3.67千字 81页立即下载

蛋白质的分离纯化 (2).ppt 4、SDS—凝胶电泳：第93页，共132页，星期日，2025年，2月5日由于蛋白质分子吸附某种盐类离子后，带电层使蛋白质分子彼此排斥，而蛋白质分子与水分子间的相互作用却加强，因而溶解度增高盐溶第61页，共132页，星期日，2025年，2月5日盐析：当溶液的离子强度增加到一定数值时，蛋白质溶解度开始下降。当离子强度增加到足够高时，例如饱和或半饱和的程度，很多蛋白质可以从水溶液中沉淀出来，这种现象称为盐析（saltingout）。第62页，共132页，星期日，2025年，2月5日大量中性盐的加入使水的活度降低，原来溶液中的大部分甚至全部的自由水转变为盐离子的水化水。导致蛋白质表面的疏水基团的暴露盐

2025-04-01 约1.27万字 132页立即下载

蛋白质纯化技术.pptx 蛋白质分离纯化与判定Isolation, Purification and Identification of Protein;分子生物学圣经—分子克隆试验指南;为何要纯化蛋白质？;蛋白质工程中进行蛋白质纯化必要性;本章概要;一、蛋白纯化办法;1.与蛋白质分离纯化有关理化特性;1.1分子大小; 透析(dialysis) 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开办法。;第10页; 超滤法应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量超滤膜，达成浓缩蛋白质溶液目标。; 超滤法应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量超滤膜，达成浓缩蛋白质溶液目标。;凝胶过滤;第14页;超速离

2023-08-25 约2千字 84页立即下载

5章蛋白质的分离纯化.ppt 第5章 蛋白质的分离纯化本章主要内容 蛋白质的性质 蛋白质分离和纯化 蛋白质的分离步骤 蛋白质的纯化方法 蛋白质含量的测定 蛋白质纯度等的测定一、蛋白质的性质 蛋白质的两性离解和电泳现象 蛋白质的胶体性质 蛋白质的沉淀作用 蛋白质的变性 蛋白质的紫外吸收一、蛋白质的性质 蛋白质与多肽一样，能够发生两性离解，也有等电点。在等电点时(Isoelectric point pI)，蛋白质的溶解度最小，在电场中不移动。在不同的pH环境下，蛋白质的电学性质不同。在等电点偏酸性溶液中，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向正极移动；在等电点偏碱性溶液中，蛋白质粒子带正电荷，在电场中向负极移动。这种现象称

2017-03-23 约4.78千字 40页立即下载

蛋白质分离纯化及鉴定.ppt 样品上柱、洗脱、收集。如图装好层析装置，打开下端出口，使溶液流出至刚好达到凝胶胶面沿柱壁缓慢加入2ml样品，打开下端出口，使样品溶液流出至刚好达到凝胶胶面，再取少量起始缓冲液洗涤柱壁。打开起始缓冲液阀门，连续洗脱。用自动部分收集器自动或手动收集，合并同一高峰各管。再生用过的凝胶经0.5M的NaOH和HCl溶液分别处理后可以恢复其性能凝胶的保存方法02%叠氮钠或0.002%双氯苯双胍己烷凝胶的再生及保存01分离蛋白质03蛋白质分子量的测定02脱盐应用聚丙烯酰胺凝胶电泳原理聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)在加速剂N，N，N?，N?-四甲基乙

2025-03-20 约1.51千字 10页立即下载

6、蛋白质的特性和分离纯化.pdf 第七章 蛋白质的性质和分离纯化第一节 蛋白质的重要性质一、蛋白质的两性解离和电泳现象 蛋白质是由氨基酸通过肽链连接起来的大分子，除了N-末端游离氨基和C-末端的游离羧基外，还含有许多可解离的侧链基团，因此蛋白质也是一种两性电解质。但是，蛋白质解离情况与单个氨基酸相比要复杂得多，除了可解离基团的数目多外，还有部分可解离基团因所处的微环境不同，解离情况明显不同，甚至于不能解离。 1、蛋白质等电点当蛋白质处在某一pH 的溶液时，蛋白质分子所带的净电荷为零，此时溶液中的pH就称为蛋白质的等电点（pI ）。

2016-03-17 约8.23千字 15页立即下载