猪Sar1b基因的分子克隆_序列分析及原核表达.pdf

畜牧兽医学报 　2007 ,38 (7) :625～629 A ct a Veteri na ri a et Zootech nica S i nica 猪 S a r1b 基因的分子克隆、序列分析及原核表达 1 ,2 1 1 1 1 1 1 1 ,3 王学敏 ,刘 　榜 ,赵书红 ,樊 　斌 ,朱猛进 ,余 　梅 ,熊统安 ,李 　奎 ( 1. 华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室 ,武汉 430070 ; 2 . 江苏省农业科学院畜牧研究所 ,南京 2 100 14 ; 3 . 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 ,北京 100094) ( ) 摘 　要 : 根据 GenBank 已发表的猪 S a r1b 基因序列 GenBank 登录号 :A Y819557 设计 1 对引物 , 以猪肝脏组织总 RN A 的反转录产物为扩增模板 ,用 R TPCR 方法扩增出猪 S a r1b 基因 cDN A 全长编码区 ,经过 EcoR IS alI 双酶切 后定向克隆于p E T28a 原核表达载体 ,获得p E T28aS a r1b 重组原核表达载体 。将携带有重组原核表达载体的大肠 ( ) 杆菌 BL 2 1 D E3 通过 1 mmol/ L ITP G 进行诱导表达 ,经过 SD SPA GE 电泳检测 ,显示诱导表达蛋白大小大约为 26 ku ,与预期表达蛋白大小一致 。West ern blot 检测显示该蛋白为 Hi s 融合蛋白,表明重组原核表达载体在大肠 杆菌中成功表达出了目的融合蛋白。猪 S a r1b 基因的克隆和表达研究 ,为进一步研究该基因的生物学功能奠定了 基础 。 关键词 : 猪 ; S a r1b 基因;克隆;原核表达 中图分类号 :S828 . 2 　　　　文献标识码 : A 　　　　文章编号 (2007) Molecular Cloning , Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of the Porcine Sa r1b Gene WAN G Xuemin1 ,2 , L IU Bang1 , ZHA O Shuhong1 , FAN Bin1 , ZHU Mengj in1 , YU Mei1 , XION G Ton gan1 , L I Kui1 ,3 ( 1. Key L aboratory of A ni m al Genet ics , B ree d i ng an d R ep rod uct ion of M i nis t ry of E d ucat ion , H uaz hong A g ricu l t u ral Uni v ers i ty , W u h an 430070 , Chi na; 2 . I ns t i t ute of A ni m al S cience , J i angs u A ca demy of A g ricul t u ral S ciences , N anj