食品中蔗糖的测定方法.doc

食品中蔗糖的测定方法酶－比色法 食品中蔗糖的测定方法，一般采用盐酸水解法。由于盐酸水解蔗糖过程中，还有其他 糖类被水解为还原糖，导致测定结果偏高。本标准采用的酶-比色法是在检索了近20年148 篇国外文献的基础上，经过反复实验、验证而制定的。由于酶法具有高度的专一性(β-果 糖苷酶只能催化蔗糖转化为葡萄糖和果糖)，灵敏度高，操作简便，因此测定结果准确。 　　蔗糖酶解后的产物-葡萄糖的测定方法，与 GB／T 16285－96保持一致。 　　食品中蔗糖的测定方法 GB／T 16286-96 酶－比色法 1 范围 本标准规定了用酶－比色法测定食品中蔗糖的方法，适用于各类食品中蔗糖的测定。 本标准最低检出限量为0.04μg(蔗糖)／mL(试液)。 2 原理 在β－果糖苷酶(β－FS)催化下，蔗糖被酶解为葡萄糖和果糖。葡萄糖氧化酶(GOD) 在有氧条件下，催化 β－D－葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化，生成D －葡萄糖酸－δ－ 内酯和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化，过氧化氢与4 －氨基安替比林和苯酚生成红 色醌亚胺。 在波长505nm处测定醌亚胺的吸光度，计算食品中蔗糖的含量。 β－FS C12H22O11 ＋ H2O ──── C6H12O6(G) ＋ C6H12O6(F) GOD C6H12O6(G) ＋ O2 ──── C6H10O6 ＋ H2O2 POD H2O2 ＋ C6H5OH ＋ C11H13N3O ──── C6H5NO ＋ H2O 3 试剂 3.1 组合试剂盒 1号瓶：内含β－果糖苷酶(fructosidase)400U(活力单位)、柠檬酸、柠檬酸三钠； 2号瓶：内含 0.2mol／L 磷酸盐缓冲液 (pH＝7.6) 200mL，其中含 4 －氨基安替比 林0. 00154mol／L； 3号瓶：内含 0.022mol／L苯酚溶液200mL； 4号瓶：内含葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)800U(活力单位)、过氧化物酶(辣根， peroxidase)2000U(活力单位)。 1、2、3、4号瓶须在4℃左右保存。 3.2 酶试剂溶液 3.2.1 将1号瓶中的物质用重蒸馏水溶解，使其体积为66mL，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使 酶完全溶解。此溶液即为β－果糖苷酶试剂，其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为0.1mol／L， pH＝4.6。在4 ℃左右保存，有效期一个月。 3.2.2 将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。 3.2.3 将4号瓶中的酶溶解在3.2.2混合液中，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使酶完全溶解， 即为葡萄糖氧化酶－过氧化物酶试剂溶液。在4℃左右保存，有效期一个月。 3.3 0.085mol／L亚铁氰化钾溶液 　　称取3.7g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O，GB1273，分析纯]，溶于100mL 重蒸馏水中， 摇匀。 3.4 0.25mol／L硫酸锌溶液 称取7.7g硫酸锌(ZnSO4·7H2O，GB666，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。 3.5 0.1mol／L氢氧化钠溶液 　　称取0.4g氢氧化钠(GB629，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。 3.6 蔗糖标准溶液 　　称取经100±2℃烘烤2h的蔗糖(HG3－1001，分析纯)0.4000g，溶于重蒸馏水中，定容 至100mL， 摇匀。将此溶液用重蒸馏水稀释V10.00 －－V100，即为400μg／mL蔗糖标准 溶液。 4 仪器和设备 　实验室常规仪器及下列各项： 4.1 研钵或粉碎机。4.2 分析筛。4.3 组织捣碎机。4.4 恒温水浴锅。4.5 可见光分光光度计。 4.6 微量移液管:1.00mL，精度0.01mL。 5 试样的制备5.1 固体样品 粉末状样品: 取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。 颗粒状样品：取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，或用研钵研细，通过100 目分析筛， 置于密闭的玻璃容器内。 新鲜水果、蔬菜等固体样品：取有代表性的可食部分至少200g，用组织捣碎机捣碎， 置于密闭的玻璃容器内。 5.2 糊状样品 取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。 5.3 固液体样品 取有代表性的样品至少200g，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。 5.4 液体样品 取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。 6 试液的制备 6.1 不含蛋白质的试样 用100mL烧杯称取试样(5.1～5.4) 0.5～10g(精确至0.0001g)，加少量重蒸馏水，转移 到250mL容量瓶中，用重蒸馏水定容至刻度。摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初的滤液30mL， 即为试液。 　　试液中蔗糖含量大于2000μg／mL时，应适当增加定容体积。