食品中细菌菌落总数测定1详解.ppt

  菌落总数的测定 (GB 4789.2—2010) 一、? 目的 1、??学习并掌握食品中菌落总数测定方法和原理。2?、了解菌落总数测定在对样品进行卫生学评价中的意义 。 二、原理 1.菌落总数:是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中形成的细菌菌落总数。以 CFU/g（mL）来表示。 一定条件包括培养基成分、培养温度和时间、pH、是否需要氧气等。 2 .菌落总数测定的卫生学意义 （1）菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 （2） 食品中细菌菌落总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较全面的评价。 三?、?材料 试剂： 0.5mol/L NaOH 100ml：称2gNaOH加蒸馏水定容至100ml，分装。 0.85% 生理盐水 300ml ：称2.55g*组别NaCL 加蒸馏水定容至300ml*组别，分装。 需灭菌器材： 1.试管1.5*15cm 3支 每支试管装9ml生理盐水 ，塞上硅胶塞，报纸包扎 2.500ml锥形瓶 1个 加225ml生理盐水 加棉塞，报纸包扎 3.吸量管桶（两组共用一个） 装12支1ml吸量管 4.培养皿桶 装10-12个培养皿（装满） 每组1个，共十个，剩下的组别自己用报纸包扎培养皿 5.培养基：胰蛋白胨0.75g 酵母浸膏0.375g 葡萄糖0.15g 琼脂2.25g 蒸馏水 150ml 装入250ml的锥形瓶，加棉塞，报纸包扎 6.研钵 1个、杵子1个、胶头滴管橡胶头2个 用报纸包扎 7.剪刀1把、镊子1把用报纸包扎 8.滤纸三张，用报纸包扎 四、??流程 1、检样 2、做几个适当倍数的稀释液 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入灭菌平皿内 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小时 6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量 7、 计算菌落总数 → 报告 五、??步骤 (一)?????取样、稀释和培养  1、?以无菌操作取检样25g（mL），放于225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振荡或研磨制成1:10的均匀稀释液。 。 （二）?菌落记录方法  做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。 到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0～4℃，但不要超过24h。   1、?平皿菌落数的选择  选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿，大于300的可记为多不可计。 2、其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可以计算半个平板后乘以2，以代表一个平板的菌落数。 3、当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。 （三）菌落总数的计算 1、若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。 2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算： 3、?若所有稀释度的平板菌落数均300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 4、若所有稀释度平板菌落数均30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数计算。 5、若所有稀释度平板均无菌落生长，则应按1乘以最低稀释倍数计算。 6、若所有稀释度均不在30～300之间，有的300，有的又30，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 （四）?菌落计数报告方法 1、菌落数在1～100时，按四舍五入报告整数。 2、菌落数≥ 100时，第三位数字按四舍五入计算，取前面两位