T_NAIA 0346-2024 葡萄酒中褪黑素及其代谢物2-羟基褪黑素、6-羟基褪黑素的测定 高效液相色谱-串联质谱法.docx

ICS67.160.10CCSC151

T/NAIA

团体标准

T/NAIA0346—2024

葡萄酒中褪黑素及其代谢物2-羟基褪黑

素、6-羟基褪黑素的测定高效液相色谱

-串联质谱法

Determinationofmelatoninand2-hydroxy-melatonin、6-hydroxy-melatonininwineHPLC-MS/MS

2024-12-03发布2024-12-15实施

宁夏化学分析测试协会发布

T/NAIA0346—2024

I

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定编写。

本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。

本文件起草单位：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家葡萄酒质量检验检测中心、国家市场监管重点实验室（枸杞及葡萄酒质量安全））、宁夏贺兰山东麓葡萄酒产业园区管理委员会、宁夏长和翡翠酒庄有限公司、宁夏化学分析测试协会。

本文件主要起草人：马雪梅、马桂娟、汤丽华、朱燕燕、王鹏、周叶丽、章苒、刘竞择、王琛、刘继辉、郭阳、吕毅、张小飞。

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葡萄酒中褪黑素及其代谢物2-羟基褪黑素、6-羟基褪黑素的测定高效液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了葡萄酒中褪黑素及其代谢物2-羟基褪黑素、6-羟基褪黑素的高效液相色谱-串联质谱检测方法。

本文件适用于葡萄酒中褪黑素及其代谢物2-羟基褪黑素、6-羟基褪黑素的测定和确证。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经N-丙基乙二胺（PSA）净化后，经反相色谱柱分离，以保留时间定性，供高效液相色谱-串联质谱仪测定和确证，外标法定量。

5试剂和材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈：色谱纯。

5.1.2甲酸：优级纯。

5.1.3N-丙基乙二胺（PSA）粉末。

5.1.40.1%甲酸溶液：取0.1mL甲酸用水定容到100mL。

5.1.550%乙腈溶液：取50mL乙腈用水定容到100mL。

5.2标准品

5.2.1标准品：褪黑素（Melatonin,MT，CAS号73-31-4）纯度：99.8%、2-羟基褪黑素（2-HydroxyMelatonin，CAS号229018-17-1）纯度：96%、6-羟基褪黑素（6-HydroxyMelatonin，CAS号2208-41-5）纯度：98%。

5.2.2标准储备液（100.0μg/mL）：分别准确称取褪黑素、2-羟基褪黑素、6-羟基褪黑素标准物质约10mg（精确至0.1mg），用甲醇溶解并定容至100mL容量瓶中,配制成100.0μg/mL的标准储备溶液，避光贮存。

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5.2.3混合标准溶液：分别准确吸取褪黑素、2-羟基褪黑素、6-羟基褪黑素标准储备液各1.0mL于10mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，配制成10.0μg/mL的混合标准储备液,避光贮存。

5.2.4标准工作溶液：分别用移液器准确吸取不同体积混合标准溶液，用50%乙腈溶液定容至1.0mL，配制成褪黑素、2-羟基褪黑素、6-羟基褪黑素的浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0ng/mL的系列标准工作溶液，临用现配。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源。

6.2天平：感量0.1mg和0.001g。

6.3涡旋混合器。

6.4高速冷冻离心机：最大转速13000r/min。

6.5移液器：量程200μL和1000μL。

7分析步骤

7.1试液的提取

吸取2mL（精确至0.01mL）混匀的葡萄酒样品(含气体的酒样应提前超声去除气体)于含有50mgN-丙基乙二胺（PSA）的净化管中，充分涡旋10min后经10000rpm/min离心5min。移取上清液经0.22μm滤膜过滤后，经高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）进行分析。

7.2仪器参考条件

7.2.1液相色谱参考条件

7.2.1.1色谱柱：C1