《45动物细胞培养》.ppt

2.3体细胞核移植技术的应用前景： 1.在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的　进程 2.保护濒危物种 3.医药卫生领域生产医用蛋白质及组织　器官的移植 4.了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究　疾病的发展过程和治疗疾病 2.4体细胞核移植技术存在的问题： 1、成功率低 2、克隆动物存在健康问题 许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。 3、克隆食品的安全性也存在着争议 思考与探究 　　2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？ 　　动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。 　　3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为3～4t。 （1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。 　　可以。卢辛达有高产奶的遗传基础，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛，其克隆牛也具有高产奶的遗传基因。 （2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？ 　　从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。取牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微操作去除卵母细胞的核，再将耳细胞核注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使其完成减数分裂和发育过程。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。 　　4.自然界中有一种含有叶绿体的原生动物──眼虫，说明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活，请探讨：动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？如果理论上可行，请设计出具体实验方案。 专题二细胞工程 制备单克隆抗体 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 动物细胞工程常用的技术 是其他动物细胞工程技术的基础。 1.动物细胞培养 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 1.1动物细胞培养的概念 2.2.1动物细胞培养 1.3 动物细胞培养的条件 1.无菌、无毒的环境 （无菌处理、加一定的抗生素，防止污染、定期更 换培养液） 2.必需的营养物质 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、激素、促生 长因子、动物血清等） 3. 适宜的温度: 36.5±0.5度 4. 充足的氧气和适宜的酸碱度: O2和CO2（95%氧气和5% CO2 ）；PH为7.2_7.4 为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 　　血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。有些氨基酸（必需氨基酸）动物细胞本身不能合成必须由培养液提供。 　　血清中有胰岛素、生长激素等及多种生长因子。血清中还含有多种未知的活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。 　　因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般须添加10%～20%的血清。 思考： 1.2 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 剪碎 胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 　　动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（1.9）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 　　动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 　　比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越强，越容易培养。 1.2 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 剪碎 胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 原代培养 贴壁生长接触抑制 细胞贴壁 细胞贴壁过程 有关概念: 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞 为原代细胞；将动物组织消化后的初 次培养称为原代培养。 原代培养的细胞保持原有细胞 的基本性质，如果是正常细胞，仍然 保留二倍体数。 细胞增殖缓慢，核型可能变化 1.2 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 剪碎 胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 贴壁生长接触抑制 贴壁细胞 细胞株 传代培养（50代左右） 洗涤、稀释、分离 传代细