《动物细胞培养》课件.ppt

动物细胞培养

课程简介课程内容涵盖动物细胞培养的基本理论、操作方法、应用领域以及相关伦理问题。教学目标

学习目标1了解动物细胞培养的概念、历史发展和优势。2掌握细胞培养基的种类、配制和保存方法。熟练掌握细胞消化、传代、活力检测等操作技术。

动物细胞培养的概念动物细胞培养是指在体外模拟体内环境，将动物细胞分离出来，在人工控制的条件下进行培养和增殖的技术。它为生物医药研究提供了重要的研究工具和模型。

动物细胞培养的历史发展119世纪末，科学家首次成功地将动物细胞在体外培养。220世纪中期，动物细胞培养技术取得重大突破，如病毒疫苗的研制和生产。321世纪初，动物细胞培养技术与基因工程、蛋白质工程等技术结合，推动了生物医药领域的发展。

动物细胞培养的优势可控性强在体外培养过程中，可以严格控制温度、pH值、营养成分等因素，使细胞生长更稳定。研究效率高相对于体内实验，细胞培养可以快速获得大量细胞，提高研究效率。应用范围广广泛应用于药物研发、生物材料制备、疾病模型构建等领域。

动物细胞培养的应用领域药物研发疫苗生产疾病模型构建生物材料制备

细胞培养基的概念细胞培养基是为动物细胞提供生长所需营养物质和环境条件的人工配制溶液，通常包含各种氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等成分。不同的细胞类型对培养基的成分和浓度有不同的要求。

细胞培养基的种类基础培养基如DMEM、RPMI-1640、MEM等，提供基本营养物质。无血清培养基不含动物血清，通常用于生产生物制品，如抗体。特殊培养基针对特定细胞类型设计，如用于神经细胞培养的Neurobasal培养基。

细胞培养基的配制根据细胞类型选择合适的培养基。按照说明书比例称取各种成分。将成分溶解于蒸馏水中，并调节pH值。过滤灭菌，并保存于4℃冰箱中。

细胞培养基的保存配制好的培养基应过滤灭菌后，保存于4℃冰箱中，避光保存。避免反复冻融，因为反复冻融会导致培养基成分降解，影响细胞生长。

细胞消化与传代细胞传代是指将已培养的细胞从培养容器中分离出来，重新接种到新的培养容器中，以继续培养的过程。细胞传代需要使用消化液将细胞从培养容器中分离下来，常用的消化液有胰蛋白酶、胶原酶等。

细胞消化的步骤弃去旧培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞。加入适量消化液，在37℃孵育一定时间。显微镜下观察细胞消化情况，当细胞大部分脱离培养瓶底时停止消化。加入含血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其分散。

细胞传代的方法细胞传代方法主要有两种：1.机械传代，通过刮除或吸取细胞进行传代。2.消化传代，通过消化液将细胞从培养容器中分离下来，然后进行传代。

传代时细胞密度的控制细胞传代时应控制接种密度，过高的接种密度会导致细胞生长缓慢或死亡，过低的接种密度会导致细胞生长缓慢或出现异常。

细胞培养环境的控制温度大多数动物细胞的最佳培养温度为37℃。1pH值动物细胞培养的最佳pH值范围为7.2-7.4。2湿度培养箱内应保持高湿度，以防止培养基蒸发过快。3CO2浓度培养箱内应保持5%的CO2浓度，以维持培养基的pH值稳定。4

培养基的更换培养基应定期更换，以提供新鲜的营养物质和清除代谢废物。更换培养基的频率取决于细胞类型和生长状况，一般为2-3天更换一次。

细胞活力检测的方法1台盼蓝染色法活细胞膜完整，无法被台盼蓝染料染色。2MTT法活细胞能够还原MTT，生成有色物质，通过比色法测定细胞活力。3CCK-8法与MTT法原理类似，但更方便快捷，毒性更低。

细胞生长动力学分析细胞生长动力学分析是指通过观察细胞在不同时间点的生长情况，绘制细胞生长曲线，可以了解细胞的生长规律、增殖速度等信息，为细胞培养实验提供参考。

细胞培养的常见问题细胞污染细菌、真菌、支原体等微生物污染细胞生长缓慢培养基成分不足、接种密度过高、细胞处于衰老状态细胞死亡培养环境不适宜、细胞培养基污染、操作不当

细胞污染的预防措施1无菌操作严格遵守无菌操作技术，避免污染的发生。2定期消毒定期对培养室、仪器、试剂等进行消毒，防止污染源的滋生。3质量控制对培养基、试剂等进行严格的质量控制，确保无污染。

细胞污染的处理方法1细菌污染使用抗生素处理，如青霉素、链霉素。2真菌污染使用抗真菌药物处理，如克霉唑。3支原体污染使用抗支原体药物处理，如支原体去除剂。

动物细胞培养的无菌操作无菌操作是指在细胞培养过程中，避免任何微生物污染的操作方法。它是保证细胞培养成功的关键步骤。

无菌操作技术要点操作前洗手消毒，并穿上实验服、戴口罩、帽子和手套。所有器材、试剂等必须灭菌后使用。操作过程中应保持安静，避免剧烈动作，减少空气流动。操作完成后，及时清理工作台面，并消毒。

超净工作台的使用超净工作台是一种用来提供无菌环境的设备，它通过风机和过滤器将空气净化后，形成无菌的区域，为细胞培养提供无菌的操作环境。

试剂和器具的无菌