动物细胞培养制药工艺课件.pptx

动物细胞培养制药工艺;4.1制药动物细胞;4.1.1动物细胞的结构与功能;葡萄糖和谷氨酰氨：能量和合成代谢的前体。

葡萄糖限制:通过增加谷氨酰氨消耗得以补偿，反之亦然。

葡萄糖代谢：糖酵解为主，生成丙酮酸和乳酸，乳酸分泌到胞外并在培养液中积累。另一条途径为TCA循循环，彻底氧化产生CO2和水。一小部分为戊糖磷酸途，生成4、5、7碳糖和NADPH。

中间产物进入脂肪酸代谢、核酸代谢和氨基酸代谢。

葡萄糖代谢旺盛，产生大量乳酸，对细胞有毒性。;Gln：脱氨、转氨等作用，合成其他必需和非必需氨基酸。

Gln氮源，Gln受限，增加其他氨基酸消耗以补偿。

离体动物细胞系，转氨作用是主要代谢途径。谷氨酰胺在脱氨酶的催化下，脱氨产生氨，对细胞有毒性。

谷氨酰氨与丙酮酸发生转氨作用，生成丙氨酸，进入培养液并积累。

Gln能量:Glu转化为α--酮戊二酸，进入TCA循环。

流加葡萄糖或谷氨酰氨，控制整个代谢过程，避免有毒废物的积累。;蛋白质合成场所：粗糙内质网上的核糖体糖基化场所：内质网合成各种糖类，粗糙内质网腔内和高尔基体，加工修饰。

不同细胞系糖基化特征不同，选择适宜细胞系。

对于分泌型蛋白，分泌泡与细胞膜融合，释放到胞外，完成了蛋白质的分泌表达。;目前用于制药的动物细胞有4类：

原代细胞系

二倍体细胞系

异倍体细胞系

融合的或重组的工程细胞系;来源：原代细胞，传代细胞。

寿命：有限细胞系，无限细胞系。

染色体数目：二倍体细胞系，异倍体细胞系。

获得方式：工程细胞系，癌变细胞系。

生长特性：贴壁依赖型，非贴壁依赖型细胞系。;1.原代细胞primarycell;2.传代细胞passagecell;3.有限细胞系Finitecellline;4.无限细胞系Infinitecellline;5.工程细胞系;6.转化细胞系;4.1.3生产用细胞系;动物细胞培养的应用;1.人源细胞系;2.哺乳动物细胞系;2.哺乳动物细胞系;2.哺乳动物细胞系;3.鸡胚;4.昆虫细胞系;动物细胞结构与功能：代谢场所，合成，修饰，分泌

动物细胞种类：原代与传代细胞，二倍体细胞，有限与连续细胞系

生产用细胞系：人源，哺乳动物源，昆虫细胞系;（1）离体动物细胞对葡萄糖和谷氨酰氨的代谢特征是什???？合成、修饰、分泌功能与制药有何关系？

（2）分析原代与传代细胞，有限与连续细胞系的异同点，举例说明制药方面的应用。

（3）最常用的两种药物生产哺乳动物源细胞系是什么，有什么特点？;4.2动物细胞的生产特征;1.对培养条件要求严格;哺乳动物细胞最佳培养温度为37℃

鸡细胞为39℃～40℃;昆虫类细胞为25℃～28℃。

耐受温度范围较窄，35℃～37℃

细胞受伤:39℃～40℃1小时，但能恢复。

受伤严重:41℃～42℃，部分可恢复。

死亡43℃以上。;2、氧气;3、pH值;正常血浆渗透压为280～310mOsm/kg

高渗溶液:高于310mOsm/kg

低渗透压溶液:低于280mOsm/kg。

动物细胞对渗透压有较强的耐受性

离体培养细胞的渗透压应控制为等渗透溶液。

增减NaCl的浓度调整渗透压，每增加1mg/mlNaCl，渗透压增加32mOsm/kg。;2.对培养基组成要求高;3.天然结构与活性的药物;4.生产工艺特征;小结;思考题;培养基组成成分

培养基种类

培养基质量控制;糖类、必需氨基酸、维生素、无机盐类、

生长类因子及激素、结合蛋白质、贴附与伸展因子及其它附加成分等。;1、糖类;2、氨基酸;3、维生素;4、无机盐类;5、生长类因子与激素;4.3.2动物细胞培养基的种类;1.天然培养基;2.合成培养基;血清(Serum)成分与作用;血清(Serum)成分与作用;血清(Serum)成分与作用;2.合成培养;3.无血清培养基;3.无血清培养基种类;4.3.3培养基质量的控制;1、培养用水质;2.缓冲液;3.生理盐水和平衡盐溶液;3.生理盐水和平衡盐溶液;4.氨基酸配制;5.NaHCO3配制;6、培养基灭菌;培养基组成成分:碳氮源、维生素、生长因子及其他附加成分

培养基种类：天然、合成、无血清培养基

培养基质量控制：原料、水质、配制、灭菌;（1）动物细胞培养基组成成分及其作用是什么？与微生物培养基相比，有何特殊性？

（2）生产用最适动物细胞培养基应该选择哪种？为什么？

（3）如何控制动物细胞培养基的质量？;4.5重组人红细胞生成素生产工艺;4.5.1概述;1、天然红细胞生成;2、EPO的理化性质;第一代：两种，rhEPO-α和rhEPO-β。

1989:Amgen,Epogen；1990,OrthoBiotech,Procrit

CHO、BHK细胞