第11讲动物细胞培养生物制药III.ppt

第11讲动物细胞培养生物制药III第1页，共31页，星期日，2025年，2月5日2010.11.2：世界肺炎日（第2个） 新民周刊2010,5.17-23.P76-9全球每年约有160万人死于肺炎链球菌疾病，平均每38秒1名5岁下儿童死于此病。导致儿童死亡的头号杀手，并高致残：智力低下、癫痫（17%）、耳聋（27.7%）。中国是10个肺炎发病率最高的国家之一，1/4儿童携带病菌；死亡儿童该病占46.8%。占西太平洋区的70%。红霉素不敏感几乎达到100%，青霉素达86%。1983年23价肺炎链球菌夾膜多糖疫苗PPV23诞生。2000年针对2岁以下儿童的7价肺炎链球菌蛋白结合疫苗PPV7问世。目前已经接种3亿剂，世界第一大单个疫苗。第2页，共31页，星期日，2025年，2月5日甲型H1N1流感病毒：2009年4月墨西哥猪流感造成数150多死亡事件，并在多个国家蔓延。H5N1禽流感：2011年仍有爆发。SARS病毒：2003年全世界性的事件。HIV病毒：艾滋病。2009年12月3日，国家食品药品监督管理局发现，江苏延申和河北福尔生物制药股份有限公司的7个批次人用狂犬病疫苗存在质量问题。2010年3月17山西疫苗事件第3页，共31页，星期日，2025年，2月5日本节主要内容1.杂交瘤技术生产单克隆抗体2.病毒疫苗生产本节关键问题杂交瘤生产单克隆抗体的制备原理与技术流程第4页，共31页，星期日，2025年，2月5日一杂交瘤技术生产单克隆抗体第5页，共31页，星期日，2025年，2月5日问题回顾：什么是细胞融合？有什么优点或作用？细胞融合（Cellfusion）是指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。体细胞杂交：克服有性不亲和性，实现远源遗传重组，在育种方面意义重大。杂交瘤细胞：具有两亲本特性，生物制药。第6页，共31页，星期日，2025年，2月5日基础知识回顾（一）免疫学基础1抗原进入动物体内对肌体的免疫系统产生刺激作用的外源物质。包括：蛋白质、多糖、核酸、病毒、细菌、各种细胞等。特点：外源性、结构性（分子表面具有稳定的环状结构基团作为识别位点）、特异性（抗原与抗体的反应）。第7页，共31页，星期日，2025年，2月5日2抗体动物免疫系统分泌的中和或消除抗原物质的影响的物质，存在于血清中，本质是免疫球蛋白（Immuniglobulin,Ig）。互补性决定区（Complementaritydeterminingregion，CDR）VH和VL的三个高变区共同组成Ig的抗原结合部位（Antigen-bindingsite）。该部位形成一个与抗原决定簇互补的表面，决定抗体的多样性与特异性。第8页，共31页，星期日，2025年，2月5日多克隆抗体与单克隆抗体动物脾脏有上百万个B淋巴细胞，一个细胞就是一个克隆，它针对抗原上的一个抗原决定族产生的抗体是单克隆抗体。一种抗原通常具有多个不同的抗原决定族，因此能刺激多个B淋巴细胞产生相应的单克隆抗体，因此血清中的抗体是针对不同抗原决定族的单克隆抗体混合物，称为多克隆抗体。第9页，共31页，星期日，2025年，2月5日问题的引出血液得到的只能是混合抗体，但是需要大量的仅针对某一个抗原决定族的单克隆抗体，几乎是不可能的，因此必须采用其他方法。如果我们能分离得到只分泌某一种特异性抗体的B淋巴细胞，不就可以大量生产相关单抗了吗？问题：可以实现吗？有什么技术限制吗？很难离体培养B淋巴细胞。第10页，共31页，星期日，2025年，2月5日（一）历史发现1975年，英国剑桥大学分子生物学研究室将已适应于体外培养的小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞（B淋巴细胞）进行融合，发现融合形成的杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征：即像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能够无限地快速增殖，又能持续地分泌特异性抗体。第11页，共31页，星期日，2025年，2月5日（二）杂交瘤技术将骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合得到即能够分泌抗体又能在体外长期繁殖的杂交瘤细胞，经过克隆化培养得到可以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，这种技术通称为杂交瘤技术（hydridomatechnique）。第12页，共31页，星期日，2025年，2月5日（三）单克隆抗体应用领域单克隆抗体的特点是：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强，广泛应用于生物学和医学研究领域：1.作为亲合层析的配体2.作为生物治疗的导向武器3.作为免疫抑制剂4.探针5.增强抗原的免疫原性6.作为医学检验