GB/T 19438.4-2004H9亚型禽流感病毒荧光　RT-PCR　检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 19438.4—2004 H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法 Method of the real-time RT-PCR for the detection of avian influenza virus subtype H9 2004-02-14 发布 2004-02-15 实施 发布 GB/T 19438.4—2004 — 1— 刖 5 GB/T 19438—2004 《禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》分为以下四个部分： ——GB/T 1943 1 - -2004 《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》； ——GB/T 1943 2--2004 《H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》； ——GB/T 1943 3- -2004 《H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》； ——GB/T 1943 4--2004 《H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》。 本部分的附录A是资料性附录。 本部分由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。 本部分起草单位 ：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、深圳市匹基生物工程股份有限公司。 本部分主要起草人:张利峰、张鹤晓、刘继红、郭晋优、刘艳华、杨伟。 T GB/T 19438.4—2004 H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法 1范围 本部分规定了荧光RT-PCR检测H9亚型禽流感病毒的操作方法。 本部分适用于活禽及其产品中H9亚型禽流感病毒的检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款 。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本部分。 GB/T 1943 1—2004 禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法 3缩略语 下列缩略语适用于本部分。 3. 1 荧光RT-PCR 荧光反转录-聚合酶链反应。 3.2 Ct值 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 3. 3 RNA 核糖核酸。 3.4 DEPC 焦碳酸乙二酯。 3.5 PBS 磷酸盐缓冲盐水。 3. 6 Taq酶 Tag DNA聚合酶。 4原理 H9亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法是采用TaqMan技术 。设计一对仅在H9亚型禽流感 病毒血凝素基因间保守的特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针 。探针的5端和3 ’端分别标记 不同的荧光素，如5端标记FAM荧光素，它发出的荧光能够被检测仪器接收，称为报告荧光基团 （用R 表示），3端一般标记TAMRA荧光素，它在近距离内能吸收5 ’端报告荧光基团发出的荧光信号，称为 淬灭荧光基团 （用Q表示）。 当PCR反应在退火阶段时,一对引物和一条探针同吋与目的基因片段结合，此吋探针上R基团发 1