动物源性食品中8种α2-受体激动剂残留量检测方法 液相色谱-串联质谱法征求意见稿）.docx
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动物源性食品中8种α2-受体激动剂残留量检测方法
液相色谱-串联质谱法
1范围
本文件规定了动物源性食品中胍那苄、溴莫尼定、可乐定、赛拉嗪、特拉唑嗪、利美尼定、美托咪定、赛庚啶液相色谱-串联质谱法（LC-MS-MS）测定方法。
本标准适用于适用于猪、牛、羊、鸡等动物的肌肉、肝脏和肾脏组织中胍那苄、溴莫尼定、可乐定、赛拉嗪、特拉唑嗪、利美尼定、美托咪定、赛庚啶的测定，检出限为1μg/kg。
2原理
样品中残留的胍那苄、溴莫尼定、可乐定、赛拉嗪、特拉唑嗪、利美尼定、美托咪定、赛庚啶用甲酸水和甲醇溶液提取，经MCX固相萃取柱净化浓缩后，用液相色谱-串联质谱仪以选择离子监测（MRM）方式进行检测，化合物利用外标法定量。
3试剂或材料
除特别注明外，本标准所用试剂均为分析纯试剂，水为超纯水，符合GB/T6682规定的一级水。
3.1胍那苄、溴莫尼定、可乐定、赛拉嗪、特拉唑嗪、利美尼定、美托咪定、赛庚啶标准品：纯度≥95%。
3.2甲酸：色谱纯。
3.3乙腈：色谱纯。
3.4甲醇：分析纯。
3.5氨水：分析纯。
3.6MCX（混合阳离子交换柱）固相萃取小柱，60mg/3mL，或等效阳离子交换柱。
3.70.2%甲酸-水：移取2mL甲酸至1L水中，混合均匀。
3.8试样提取液：100mL0.2%甲酸-水溶液与900mL甲醇混合均匀。
3.90.2%甲酸水-乙腈溶液（8+2）：量取800mL0.2%甲酸-水和200mL乙腈混合均匀。
3.100.1%甲酸水：移取1mL甲酸至1L水中，混合均匀。
3.11有机相滤膜：0.45μm。
3.12标准贮备溶液：
称取胍那苄、溴莫尼定、可乐定、赛拉嗪、特拉唑嗪、利美尼定、美托咪定、赛庚啶标准品10.0mg(精确至0.0001g)，置于100mL容量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。制成100μg/mL的溶液，作为标准储备液，置4℃保存，储存期为3个月。
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3.13标准工作液：
准确移取标准储备液1mL置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到1.0μg/mL标准工作液，置4℃保存，储存期为1个月。
4仪器设备
4.1液相色谱-串联质谱仪。
4.2电子天平。
4.3离心机。
4.4氮吹仪。
4.5振荡器。
4.6涡旋混合器。
4.7超声仪。
5试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎并使均质。
----取均质的供试样品，作为供试试料。
----取均质的空白样品，作为空白试料。
----取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
样品在-20°C以下保存。
6试验步骤
6.1提取
称取2.00g样品于50mL离心管中，加10mL试样提取液振荡混匀，超声提取30min，于8000r/min离心10min，上清液待净化。
6.2净化
MCX固相萃取柱依次用3mL甲醇、3mL水活化，将提取液过已活化的固相萃取柱，全部弃去，用3mL水、3mL甲醇淋洗，抽干后用3mL5%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液于玻璃试管中，在55℃下氮气吹干，用1mL0.2%甲酸水-乙腈溶液（8+2）溶解残留物，过0.45μm滤膜，待上机检测。
6.3基质匹配标准曲线的制备
准确量取混合标准工作液适量，用空白样品提取液稀释，配制成α2-受体激动剂类药物浓度为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的系列基质标准工作液，现用现配。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
6.4测定
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6.4.1液相色谱条件
色谱柱：VC-C18，2.1*100mm，2.5μm或相当者
柱温：25℃
流速：0.2mL/min
进样量：5μL
运行时间：16min
流动相：A：0.1%甲酸水，B，乙腈，流动相梯度见表1。
表1流动相的梯度洗脱程序
时间/min
A/%
B/%
0
100
0
2.00
100
0
5.00
50
50
10.00
0
100
12.00
0
100
14.00
100
0
16.00
100
0
6.4.2质谱条件
a)离子化模式：正离子模式（ESI+）。
b)质谱扫描方式：多反应监测（MRM）。
c)气帘气：35psi。
d)雾化气：55psi。
e)辅助气：55psi。
f)电喷雾电压：5500V。
g)离子源温度：550℃
定性、定量离子及对应的锥孔电压和碰撞电压见附