目的基因的检测与鉴定.pdf

2022年高考生物总复习：目的基因的检测与鉴定

(1)界定“标记基因”与“DNA分子杂交技术”在目的基因检测中的作用：

①载体上标记基因的标记原理

载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没

有抵抗相关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性

基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应抗生素，所以在受体细胞的培

养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞，倘若在选择培养基

中不能存活，则表明无质粒转入，当然不会有“目的基因”转入，能存活时必含

目的基因，原理如下图所示：

②“标记基因”筛选后为何还需应用“DNA分子杂交技术”确认目的基因是否

转入？

经上述步骤筛选得到的受体细胞，只是含特定(具有标记基因)的质粒，然而，该

质粒上是否成功嵌入了目的基因，还不能确定，故仍需使用“目的基因”作探针，

利用DNA分子杂交技术，检测受体细胞的质粒上是否含目的基因。

(2)使用“目的基因”作探针，运用“分子杂交技术”检测目的基因是否转录出

特定mRNA。

(3)采用“抗原—抗体杂交技术”，从转基因生物中提取蛋白质(作抗原)与相应抗

体杂交，依据是否出现杂交带确认目的基因是否“指导”特定蛋白质的合成。

(4)采用抗虫、抗病毒等“接种实验”进行目的基因成功表达的“个体生物学”

水平的检测。

1.如图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将插入到质粒上的A处，则切割基

因时可用的是()。

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A.HindⅢB.EcoRⅠ

C.EcoBD.PstⅠ

解析A处有BamHⅠ、EcoB、ClaⅠ限制酶的切点，使用A～D中的EcoB

切割时，才能让目的基因插入到A处。

答案C

2.为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将从陆地棉基因库中获取的酶D基因

与位于拟南芥叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得转基因油菜品

种。酶D基因、转运肽基因所含三种限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ)的切点如图

所示。请回答下列问题：

(1)用限制酶________和________酶处理两个基因后，可得A、D端相连的目

的基因。

(2)将上述目的基因插入如图所示质粒的________中，构建________，然后将其

导入农杆菌中。

(3)利用________法将目的基因导入油菜叶片中，并通过筛选获得转基因油菜细

胞，通过________技术可培育成转基因油菜植株。

(4)用________技术可检测转基因油菜的染色体DNA上是否插入了目的基因，用

________技术可检测转基因油菜植株中的目的基因是否翻译成蛋白质。

答案(1)ClaⅠDNA连接(2)T－DNA基因表达载体(3)农杆菌转化植

物组织培养(4)DNA分子杂交抗原—抗体杂交

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