类风湿性关节炎患者外周血T淋巴细胞Ag-NORs及其T亚群的变化.pdf

1类风湿性关节炎患者外周血 T淋巴细胞Ag—NORs及T亚群的变化 周晖1，江楚文2，石蕴珍3，崔阳3，张建军1，周茂华1 (广东省人民医院，1检验科，2广东省临床检验中心，3风湿科，广州510080) 【摘要】 方 目的：探讨外周血T淋巴细胞Ag—NORs及T亚群在类风湿性关节炎中的应用价值。 法： 32例类风湿性关节炎患者，17例病人处于活动期，15例经治疗后处于缓解期。36例健康体检者 而CDe+细胞降低(PO．05o (PO．05)，CDs*细胞较活动期升高(卢0．05)，与对照组相比均无显著性差异(乃0．05o CD。+T细胞在 RA活动期、缓解期中与对照组相比均无显著性差异(胗O．05o T淋巴细胞Ag～NORs与CD。+、CD。+、CDe+ 含量、T细胞亚群分析与RA的发生、发展、治疗有一定关系，结合二者，在观察SLE患者的机体免疫 状态、疗效方面，有一定意义。 【关键词】关节炎，类风湿；核仁组成区；T淋巴细胞亚群；T淋巴细胞 类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是典型的自身免疫疾病，主要病变特征为持续性、进 行性的滑膜炎，继而引起周身对称性多关节病变，具有很大的危害性与致残性，其发病原因和机制目 前尚不清楚。在过去相当长的一段时间里，体液免疫异常导致产生过量的自身抗体一直被作为RA发 病机理的基础。然而近些年的研究发现，T淋巴细胞数量、功能异常导致细胞免疫调节紊乱是本病的 关键。由于RA病程漫长及检测手段不同，使得对T细胞的研究虽多，但结果却不太一致。核仁形成 nucleolar 区嗜银蛋白(argyrophilic regions，Ag—NORs)可反映细胞增殖能力及活性。下面将研 organizer 究类风湿|生关节炎患者外周血T淋巴细胞Ag—NORs及T亚群的变化。 材料和方法 一．研究对象：类风湿性关节炎患者32例，其诊断根据1987年美国风湿病协会ARA诊断标准， 年龄20～67岁，平均43岁，其中男9例，女23例。17例病人处于活动期，15例经治疗后处于缓解期。 选择36例性别、年龄组成相匹配的健康体检者，作正常对照。 P 二．试剂和仪器：R MI一1640培养液，银染液，低渗液，均为北京健尔康医疗设备有限公司产 L型肿瘤免疫图像分析系统，北京 FITC—CD4／PE—CD8／PE—Cy5．5一CD3，BECKMAN—COULTER公司。K 健尔康公司。BDFACScalibur流式细胞仪，美国BD公司。 。基金项目：广东省医学科学技术研究基金项目(A2001785) ·_——148’‘—— ml抗凝血加到培养液中，37℃培养72h。(2) i．Ag—NORs柃测：(1)培养：无菌条件下取0．3。0．5 i 细胞分离：旋转培养瓶使上层绌胞浮起后倒入离心管中，离心5m 11。弃上清液后加入5ml低渗液， i m m 置37℃lOmn。加0．5l同定液，混匀，离心弃上清液。加5l同定液并混匀，离心弃上清液， 此步骤重复一次。在沉淀物中加入0．3m1同定液制成细胞悬液。(3)制片：将细胞悬液滴到预冷的玻 片上，自然晾干。(4)银染：水浴箱温度升至80％。90。C，隔水放铝板，将玻片放于铝板上。加银染液， 盖上盖玻片，待涂片变成深黄色时取下用净水冲洗干净，自然晾干。(5)图像分析：将染片置显微镜下 观察，用KL型肿瘤免疫图像分析系统分析，计数30个T淋巴细胞银染核仁灰度面积与细胞核灰度面 积比值(I．S％)，该比值可反映Ag—NORs含量的高低。 l 四．T淋巴细胞亚群柃测：在i支榆测管中分别加入20u 血素2ml，放置5—10rain，待红细胞裂