GB 4789.3-2016食品安全国家标准　食品微生物学检验　大肠菌群计数.pdf

GB4789.3-2016 食品微生物学检验 大肠菌群计数 定义 •在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧 和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 •直接或间接来自人与温血动物的肠道；包括肠杆 菌科的大肠埃希菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属 和克雷伯菌属，其中大肠埃希菌属为典型大肠埃 希氏菌。 大肠菌群的卫生学意义 •人与温血动物粪便污染的指示菌： •大肠埃希氏菌——粪便近期污染； •其他菌属——粪便陈旧污染。 •肠道致病菌污染食品的指示菌： •与肠道致病菌 （如沙门氏菌、志贺氏菌）来源相同； 在外界生存的时间与主要肠道致病菌一致。 修订的主要内容 •本标准与GB 4789.2-2010 相比，主要修改如下： • 删除了标准的英文名称； • 修改了发布单位名称： • 2010版本 “中华人民共和国卫生部” • 2016版本 “中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会” 和 “国家食品药品监督 管理总局” • 前言： • 本标准代替GB4789.3-2010 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》 GB/T4789.32-2002 《食品卫生微生物学检验 大肠菌群的快速检测》和SN/T0169- 2010 《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》大肠菌群计数 部分。 • 增加了检验原理; • 修改了适用范围; • 修改了典型菌落的形态描述; • 修改了第二法平板菌落数的选择; • 修改了第二法证实试验; • 修改了第二法平板计数的报告。 大肠菌群计数 •第一法 MPN法 •适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数; •第二法 平板计数法 •适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。 术语和定义 •大肠菌群 Coliforms •在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼 性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 •最可能数 Most Probable Number(MPN） •基于泊松分布的一种间接计数方法。 检验原理 •MPN 法 •MPN 法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待 测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释 度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测 样品中大肠菌群的最大可能数。 • 平板计数法 •大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸,在指示剂的作 用下形成可计数的红色或紫色,带有或不带有沉淀环的 菌落。 大肠菌群计数 第一法 MPN法 检 样 25g(mL)样品+ 225mL 稀释液，均质 10 倍系列稀释 选择适宜三个连续稀释度的样品匀液，接种LST 36℃±1℃ 24h-48h 不产气 产 气 BGLB 肉汤 36℃±1℃ 48h±2h 不产气 产 气 大肠菌群阴性管 大肠菌群阳性管 查 MPN 表 结果报告 LST初发酵 BGLB验证 报 告 第一步培养基 初发酵培养基：月桂基硫酸盐胰蛋白胨 （LST）肉汤 A.1.1 成分 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g 提供氮源 氯化钠