奶粉中亚硝酸盐量的测定.doc

生物工程系专业实验报告书 专业：生物技术及应用 班级：生物专08-1 指导老师：刘杰凤 姓名：吴诗平 学号：08113090116 成 绩： 奶粉中亚硝酸盐的测定 一、实验目的 1.掌握样品制备、提取的基本操作技能。 2.进一步熟练掌握分光光度计的结构和使用方法。 3.掌握比色法测定食品中亚硝酸盐的原理和方法。 二、仪器与试剂 1．仪器 ①分光光度计；②比色管、移液管、容量瓶等常用玻璃仪器 2.试剂 ①亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾溶于水，并定容至1000ml。 ②乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌，加30ml冰醋酸，溶于水并定容至1000ml。 ③硼砂饱和溶液：称取5g硼砂溶于100 ml热水中，冷却后备用。 ④0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100 ml 20%的盐酸中，避光保存。 ⑤0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100 ml水中，避光保存。 ⑥亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24小时亚硝酸钠，加水溶解移入500 ml容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每ml相当于200ug亚 硝酸钠。 ⑦亚硝酸钠标准使用溶液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00 ml, 置于100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每ml相当于10ug亚硝酸钠。 三、实验原理 样品经沉淀分离蛋白质，除去脂肪后，在弱酸的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮化反应，生成重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合，形成紫红色的的染料，其颜色的深浅与亚硝酸盐的含量成正比，可与标准比较定量。通过分光光度计比色测定，计 算出样品中亚硝酸盐的含量。反应如下： 三、实验步骤 1、样品处理 准确称取奶粉2.50克于50ml烧杯中，硼砂饱和溶液6.3ml，以70℃以上的热水100～150ml将样品搅拌均匀后，全部洗入250ml容量瓶中，放入沸水浴中加热15分钟，取出冷却后，边转动容量瓶边加入亚铁氰化钾溶液2.5ml，摇匀后，再加入乙酸锌溶液2.5ml，以沉淀蛋白质。然后，加水至刻度，混匀，放置半小时后，弃去上层脂肪，清液用滤纸或脱脂棉过滤，弃去初滤液5～10ml，滤液备用。 2、测定 吸取上述滤液20ml于25ml带塞比色管中，同时吸取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml 5ug/mL的亚硝酸钠标准溶液（相当于0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ug/25mL的亚硝酸钠）分别置于25ml比色管中。 在样品管及标准管中分别加入0.4%对氨基苯磺酸溶液1ml，混匀后静置3～5分钟，然后又在各管及标准管中分别加入0.2%盐酸萘乙二胺溶液0.5ml，加水至刻度，摇匀，静置15分钟后，用2cm的比色皿，以零管调节零点，于波长538nm处，测吸光度。并查出待测液的亚硝酸盐含量。 3、求出线性回归方程，并以回归方程绘制标准曲线，用回归方程求出奶粉中含亚硝酸盐的量，计算线性相关系数及相对误差。 （mg/kg ） 式中：X—样品中亚硝酸盐的含量，g/kg； A—样品溶液中亚硝酸盐的含量，ug； m—样品的质量，g。 —测定时吸取样品液的体积与样品定容体积之比。 计算结果保留两位有效数字。 四、实验结果与数据处理 管号 0 1 2 3 4 5 样1 样2 10μg/mLNaNO2 0 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 标准液/mL 相当于亚硝酸钠量 0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 / / /μg 样品提取液/mL / / / / / / 0.05 0.05 0.4%对氨基磺 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00苯酸溶液/mL 混匀3~5min 0.2%盐酸萘乙二胺 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50溶液/mL 加水至刻度,混匀静置15min OD538nm 0 0.024