南方水稻黑条矮缩病2017.ppt

江西某农药零售店过量施用氮肥2003年,国际水稻研究所India92.6VietNam114.3Phillipines51.3Japan100US153.8China180长三角270-300浙江双季150-225单季180-250氮肥过量氮肥诱导稻飞虱4foldincreaseinNfrom100Nto400Ncanresultin40foldincreaseinBPHdensityat100days.100N400NHeong,2008（2）为何白背飞虱高效传毒？生物学实验结果（引自周国辉）无毒白背飞虱获毒取食时间和传毒取食时间多数为30分钟以上，最短5分钟。病株上扩繁的二代白背飞虱带毒率为70%左右；90%左右带毒白背飞虱具有传毒能力；多数白背飞虱获毒后需间隔5-10天（循徊期）才能传毒。白背飞虱高效获毒和传毒能力

（福建农林大学）高效获毒：80%-100%的1-2龄若虫可以获毒。高效获毒：循回期短，有少量若虫经过3天时间即可传毒，多数5-8天可传毒。XSRBSDV病毒粒体介体白背飞虱√难点:植物病毒的介体昆虫传毒机理√病株为什么白背飞虱可以高效传毒？ArchVirol,2012;JVIP7-1小管病毒粒体P9-1-Rhodamine病毒原质P9-1抗体病毒原质SRBSDV在介体细胞内的复制场所：病毒原质SRBSDV在介体细胞间扩散——包裹病毒的小管(?)SRBSDV在白背飞虱体内复制周期的可能模型。病毒原质包裹病毒的P7-1小管伸出细胞膜进入邻近细胞P7-1抗体鉴定出与病毒在介体细胞中复制和扩散相关的2个非结构蛋白：P9-1、P7-1P7-1抗体SRBSDV在介体白背飞虱体内的侵染循回过程五、南方水稻黑条

矮缩病的监测技术实验室诊断技术（1）针对核酸：dsRNA基因组快速鉴定、RT-PCR检测、核酸斑点印迹法（2）针对蛋白：ELISA检测、斑点免疫、WesternBlot①dsRNA基因组快速鉴定RGDVRDVRDVSRBSDVRDVRRSVSRBSDVSRBSDVRRSVRRSV每一种水稻dsRNA病毒都有特异性基因图谱提取病毒dsRNA基因组的快速方法dsRNA的快速小量提取法简要步骤：（1）研磨：典型症状的水稻病叶于液氮研磨成粉末；（2）抽提：用2×STE及酚、氯仿抽提，低速离心；（3）吸附：上清液调至含17%乙醇的溶液，与含17%乙醇的1×STE平衡过的纤维素（CF-11）混合，促使核酸吸附；（4）洗涤：用含17%乙醇的1×STE反复洗涤，直至CF-11变白为止。（5）洗脱处理：用不含乙醇的1×STE洗脱，洗脱液用异丙醇、乙醇沉淀后真空抽干，即为dsRNA。两种dsRNA基因组的提取方法比较dsRNA基因组快速鉴定存在问题当两种病毒dsRNA基因组电泳图谱相同或相似时，无法用该方法区分，如RBSDV和SRBSDV福州RBSDV样品公安SRBSDV样品孝感SRBSDV样品福州SRBSDV样品福建省病毒检测分布②RT-PCR验证基于引物PS10A/PS10B的RT-PCR检测1,湖北公安样品；2,湖北孝感样品；3,SRBSDV福州样品；4,RBSDV福州样品基于引物PJF/PPJR/PNJR的RT-PCR检测1,RBSDV福州样品；2,SRBSDV福州样品；3,SRBSDV福建连城样品；4,湖北公安样品；5,湖北孝感样品；6,白背飞虱；7,灰飞虱③核酸斑点印迹法厦门同安区3月29日至4月10日灯下白背飞虱样品，共31只，其中2只带毒，带毒率为6.45%。实验室条件下，在水稻病株上饲毒后度过循回期的白背飞虱检测21头，有19头获毒，带毒率为90.47%。海南琼中县12株水稻疑似样品经过检