水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.docx

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水产品中孔雀石绿和结晶紫多残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了鲜活水产品及加工水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。

本文件适用于鱼、虾、蟹、贝、鳖、鱼干、虾干、鱼糜等可食组织中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫残留量的测定，其他鲜活水产品及加工水产品可参照执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T30891水产品抽样规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

鲜活水产品采用乙腈提取，提取液经中性氧化铝固相萃取柱净化；加工水产品采用乙腈-乙酸铵缓冲液提取，二氯甲烷液液分配，提取液经中性氧化铝固相萃取柱和阳离子交换固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

5试剂与材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.2甲酸（HCOOH）：色谱纯。

5.1.3乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。

5.1.4二氯甲烷（CH2Cl2）。

5.1.5冰醋酸（CH3COOH）。

5.1.6对甲苯磺酸（CH3C6H?SO3H）。

5.1.7盐酸羟胺（NH3ClOH）。

5.2溶液配制

5.2.15mol/L乙酸铵缓冲液：称取38.5g乙酸铵，用水溶解并稀释至100mL，用冰醋酸调节pH至7.0±0.1。

5.2.21.0mol/L对甲苯磺酸溶液：称取17.2g对甲苯磺酸，用水溶解并稀释至100mL。

5.2.30.25g/mL盐酸羟胺溶液：称取25g盐酸羟胺，用水溶解并稀释至100mL。

5.2.42%甲酸溶液：取甲酸2mL，用水溶解并稀释至100mL。

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5.2.5含0.1%甲酸的乙酸铵溶液：称取0.39g乙酸铵，加入1mL甲酸，用水稀释到1000mL。

5.2.6含5%5mol/L乙酸铵缓冲液的甲醇溶液：取5mol/L乙酸铵缓冲液5mL，用甲醇稀释至100mL。

5.2.7含0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸1mL，用乙腈稀释至1000mL。

5.2.85%乙腈溶液：移取乙腈5mL，用水溶解并稀释至100mL。

5.3标准品

孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫，纯度均大于97.0%；孔雀石绿-D5、隐色孔雀石绿

-D6、结晶紫-D6、隐色结晶紫-D6，纯度均大于97.0%。化学分子式和CAS号见附录A表A.1。

5.4标准溶液制备

5.4.1标准储备液：精密称取孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫标准品各适量(相当于各活性成分约10mg)，分别于100mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100μg/mL的标准储备溶液，于-18℃冰箱内避光保存，有效期为6个月。

5.4.2内标标准储备液：精密称取孔雀石绿-D5、隐色孔雀石绿-D6、结晶紫-D6、隐色结晶紫-D6同位素内标标准品各适量(相当于各活性成分约10mg)，分别于100mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100μg/mL的内标标准储备溶液，于-18℃冰箱内避光保存，有效期为6个月。

5.4.3混合标准工作液：分别精密量取标准储备液100μL，于100mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100ng/mL的标准工作溶液，于-18℃冰箱内避光保存，有效期为1个月。

5.4.4混合内标工作液的配制：分别精密量取内标标准储备液100μL，于100mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100ng/mL的标准工作溶液，于-18℃冰箱内避光保存，有效期为1个月。

5.5材料

5.5.1中性氧化铝固相萃取柱：1g/3mL，使用前用5mL乙腈活化。

5.5.2阳离子交换固相萃取柱：60mg/3mL，使用前用3mL乙腈，3mL2%甲酸溶液活化。

5.5.3尼龙微孔滤膜：0.22μm。

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