DB34_T2252-2014_水产品中孔雀石绿残留的检测—胶体金免疫层析法_安徽省.docx
ICS67.120.30
B50
DB34
安徽省地方标准
DB34/T2252—2014
水产品中孔雀石绿残留的检测—胶体金免
疫层析法
Detectionofmalachitegreenresidueinaquaticproducts-Colloidalgold
immunochromatographicmethod
安徽省质量技术监督局发布
DB34/T2252—2014
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由合肥市渔政监督管理站提出。
本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：合肥市畜牧水产技术推广中心、合肥市渔业协会、杭州南开日新生物技术有限公
司。
本标准起草人：赖年悦、孙德祥、桑丽雅、周作友、徐薇、陈友顺、杨锐、曹海、张军、夏俊华、
陈元生、程定文、方凯、钱继银、桂淦、胡积清、戴靖、陈晓荣、徐丽、沈亭海、徐经云、洪家春。
I
DB34/T2252—2014
水产品中孔雀石绿残留的检测-胶体金免疫层析法
1
范围
本标准规定了水产品中孔雀石绿（MalachiteGreen，MG）及其代谢物隐色孔雀石绿（Leucomalachite
Green，LMG）残留的检测——胶体金免疫层析法的原理、试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、结果判
断及表述、结果确证的方法。
本标准适用于鱼、甲鱼、龟肌肉组织和虾、蟹去壳、肠腺的可食用组织中孔雀石绿及其代谢物隐色
孔雀石绿残留的快速筛查检测。
本标准方法的检出限为：3.0μg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
本法为竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。样品中残留的孔雀
石绿及其代谢物隐色孔雀石绿，以乙酸胺盐溶液和乙腈提取，正己烷净化，经四氯苯醌将隐色孔雀石绿
氧化成孔雀石绿，转入并溶解金标微孔内包被的抗孔雀石绿抗体和胶体金的结合物，再滴加到孔雀石绿
胶体金免疫快速检测试剂板的加样孔中，样品溶液以硝酸纤维素（NC）膜为载体，利用微孔膜的毛细管
作用缓慢向另一端渗移，在移动的过程中，样品溶液中的孔雀石绿与胶体金标记的特异性单克隆抗体结
合，从而抑制了抗体和检测线上特异性结合抗原的结合，未被孔雀石绿结合的抗体与检测线上的抗原反
应，并通过胶体金的颜色而显示出红色条带。用胶体金读卡仪或目测比较板/卡上控制线（C线）和检
测线（T线）上红色条带的有无及颜色的相对深浅进行判定。当样品中的孔雀石绿或隐色孔雀石绿含量
达到或超过本方法检出限时，检测线较控制线显色淡甚至无显色，判定为阳性。反之，当样品中的孔雀
石绿或隐色孔雀石绿含量在本方法检出限以下或无残留时，检测线与控制线显色一致或偏深，判定为阴
性。
4
除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。
1
DB34/T2252—2014
4.7氯化钙（CaCl2）。
4.8
正己烷（C6H14）。
4.9四氯苯醌（C6Cl4O2）：化学纯。
4.10氢氧化钠（NaOH）。
4.11乙酸胺盐溶液：称取对甲苯磺酸5.16g，盐酸羟胺0.1g，乙酸铵0.2g，加水溶解，定容至
500mL，用4mol/L4.10氢氧化钠调pH至4.5。
4.120.1％四氯苯醌溶液：溶解0.1g四氯苯醌（4.9）于80mL水中，加水定容至100mL。
4.13孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂板。
4.13.1孔雀石绿结合抗原：偶联率为1:10～1:20（载体蛋白:MG）。
4.13.2抗孔雀石绿抗体：多抗或单抗。多抗效价应大于5000（间接ELISA法），或有效抗体含量应
大于0.05mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。单抗效价应大于15000（间接ELISA
法），或有效抗体含量应大于0.5mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。抗体相对亲和
力应大于3.0×109（结合率下降50％时，相对应的抗体浓度的倒数）。
4.13.3样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。
4.13.4金标微孔：微孔底部包被有抗孔雀石绿抗体和胶体金的结合物。
4.13.5NC膜：4cm毛细管时间121s～149s。
4.13.6吸水垫：滤纸、玻璃纤维或吸水纸。
4.13.7背衬：PV