《水产品中硝基呋喃类代谢物的快速测定 胶体金免疫层析法》.docx
B50
唐
DB130
山市地方标准
DB1302/T341—2012
水产品中硝基呋喃类代谢物的快速测定胶体金免疫层析法
2012-11-20发布2012-12-10实施
唐山市质量技术监督局发布
DB1302/T341—2012
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准由唐山市质量技术监督局提出。
本标准起草单位：唐山市畜牧水产品质量监测中心。
本标准起草人：蒙君丽、李爱军、葛怀礼、董李学、苗建民、郑百芹、刘洋、张洁、刘志强、卫大群。
DB1302/T341—2012
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水产品中硝基呋喃类代谢物的快速测定胶体金免疫层析法
1范围
本标准规定了水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的样品制备和胶体金免疫层析法测定。
本标准适用于水产品中硝基呋喃类代谢物（呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林）的快速筛选测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682–2008分析实验室用水规则和试验方法
3制样
3.1样品的制备
取新鲜或解冻的供试水产品肌肉组织，剪碎，置于组织匀浆机中充分匀浆。
3.2样品的保存
-20℃冰箱中贮存备用。
4测定方法
4.1方法原理
硝基呋喃类代谢物胶体金免疫层析法应用了竞争抑制免疫层析的原理，样品中的呋喃类代谢物在流动过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线(T)上硝基呋喃类代谢物-蛋白偶联物的结合。如样品制备液中呋喃类代谢物含量大于检测线(T)时，检测线(T)不显颜色，结果为阳性。反之，检测线(T)显红色，结果为阴性。
4.2试剂和材料
以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的三级水。
4.2.1硝基呋喃类检测卡(试剂盒自带)：4℃~30℃阴凉避光干燥处储存。
4.2.2乙酸乙酯。
4.2.3衍生化试剂(试剂盒自带)。
4.2.4吸管(试剂盒自带)。
4.2.5试剂A试剂B试剂C试剂D(试剂盒自带)。
4.3仪器和设备
4.3.1组织匀浆机。
4.3.2天平：感量0.01g。
4.3.3振荡器或混旋器。
4.3.4离心机。
4.3.5氮气吹干装置。
4.3.6微量移液器：单道20μL～200μL、200μL～1000μL、多道300μL。
4.3.7计时器。
DB1302/T341—2012
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4.4试样制备
称取3g(±0.05g)已均质样品于15ml离心管中，加入4ml蒸馏水或去离子水，0.5ml试剂A和600μl衍生化试剂，充分振荡，在65℃水浴中孵育30min。分别加入1ml试剂B,0.4ml试剂C和4ml乙酸乙酯，剧烈振荡5min;在温度15℃~30℃4000r/min离心5min;取出上层2ml的乙酸乙酯到另一个15ml离心管中，(注意：请勿吸取脂肪层和下层液体),于50℃水浴中用氮气吹干(若无氮气可将乙酸乙酯放入50ml的锥底离心管中，用吹风筒吹干);用1ml正己烷溶解干燥物，充分振荡混合2min,加入0.5ml试剂D充分振荡混合2min,在温度15℃~30℃4000r/min离心5min。
5检测和结果判定
5.1检测
取出待测检测卡(见图1),平放，用塑料吸管或移液枪取4.4中液体80μl(2~3滴)于加样孔，目测检测线，5min~10min内观察结果。
5.2结果判定
5.2.1检测线(T)和质控线(C)均呈现肉眼可见红色线的为阴性。(见图2)
5.2.2检测线(T)无显色，质控线(C)呈现肉眼可见红色线的为阳性。(见图3)
5.2.3检测线(T)和质控线(C)均无显色，或只出现检测线(T)而质控线(C)无显色的为无效。(见图4)注：检测卡在打开包装1h内使用。
6检测限和结果确认
6.1检测限
呋喃唑酮代谢物：1μg/kg;呋喃它酮代谢物：2μg/kg;呋喃妥因代谢物：2μg/kg;呋喃西林代谢物：2μg/kg。
6.2结果确认
阳性样品应用液相色谱串联质谱方法进行确认。
待测检测卡
图1
阴性卡
图2
阳性卡
图3
无