DB34_T2254-2014_水产品中氯霉素残留的检测-胶体金免疫层析法_安徽省.docx

ICS67.050

B50

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2254—2014

水产品中氯霉素残留的检测—胶体金免疫

层析法

Detectionofchloramphenicolresidueinaquaticproducts-Colloidalgold

immunochromatographicmethod

安徽省质量技术监督局

发布

DB34/T2254—2014

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由合肥市渔政监督管理站提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：合肥市畜牧水产技术推广中心、合肥市渔业协会、杭州南开日新生物技术有限公

司。

本标准起草人：赖年悦、孙德祥、桑丽雅、周作友、徐薇、陈友顺、杨锐、曹海、张军、夏俊华、

陈元生、程定文、方凯、钱继银、桂淦、胡积清、戴靖、陈晓荣、徐丽、沈亭海、徐经云、季曙春。

I

DB34/T2254—2014

水产品中氯霉素残留的检测-胶体金免疫层析法

1

范围

本标准规定了水产品中氯霉素（Chloramphenicol，CAP）残留的检测——胶体金免疫层析法的原理、

试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、结果判断及表述、结果确证的方法。

本标准适用于鱼、甲鱼、龟肌肉组织和虾、蟹去壳、肠腺的可食用组织中氯霉素残留的快速筛查检

测。

本方法的检出限为0.3μg/kg。

2

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682

分析实验室用水规格和试验方法

3

原理

本法为竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。样品中残留的氯霉

素，经乙酸乙酯提取，正己烷净化，滴加在氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板的加样孔中，样品溶液以

硝酸纤维素（NC）膜为载体，利用微孔膜的毛细管作用缓慢向另一端渗移，在移动过程中，样品溶液中

的氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，从而抑制了抗体和检测线上特异性结合抗原的结合，

未被氯霉素结合的抗体与检测线上的抗原反应，并通过胶体金的颜色而显示红色条带。用胶体金读卡仪

或目测比较板/卡上控制线（C线）和检测线（T线）上红色条带的有无及颜色的相对深浅进行判定。

当试样中的氯霉素含量达到或超过本方法检出限时，检测线较控制线显色淡甚至无显色，判定为阳性；

反之，当试样中的氯霉素含量在本方法检出限以下或无残留时，检测线与控制线显色一致或偏深，判定

为阴性。

4试剂和材料

4.3正己烷（C6H14）。

4.4氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板

4.4.1氯霉素结合抗原：偶联率为1∶10～1∶20（载体蛋白：CAP）。

4.4.2抗氯霉素抗体：多抗或单抗。多抗效价应大于5000（间接ELISA法），或有效抗体含量应大

于0.05mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。单抗效价应大于15000（间接ELISA法），

或有效抗体含量应大于0.5mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。抗体相对亲和力应大

1

DB34/T2254—2014

4.4.3样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。

4.4.4金释放垫：聚酯纤维片，免疫金释放时间小于5min，释放效率大于80％。

4.4.5NC膜：4cm毛细管时间121s～149s。

4.4.6吸水垫：滤纸或玻璃纤维或吸水纸。

4.4.7背衬：PVC。

4.4.8塑料模板。

4.4.9PBST缓冲液。

4.4.10储存与使用。密封包装，干燥阴凉处保存，用前恢复至室温，即开即用。

5仪器和设备

5.1电子天平：感量0.01g。

5.2均质机：转速≥8000r/min。

5.3离心机：离心力≥3000g。

5.4氮气或空气吹干仪：加热温度≥60℃。

5.5微量移液器：10μL～100μL，100μL～1000μL。

5.6胶体金读卡仪：测量精度±0.02RLU（@0.4RLU）、±0.04RLU（@0.4RLU）。

6测定步骤

6.1试样制备

鱼去鳞、去皮，取肌肉部分；甲鱼、龟取肌肉部分；虾、蟹去壳、肠腺，取可食部分。切成0.5cm×0.5

cm×0.5cm的小块后混合，用均质机制成糜状。

称取2.0g(±0.1g)均质后的样品于5mL离心管中，加入3mL乙酸乙酯，剧烈振荡3min，

室温下，3