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分子生物学技术62513Northern印迹后进行杂交反应可鉴定其中特异mRNA分子的量与大小。

Northern印迹的方法与Southern印迹基本相同，可参照进行。但RNA的变性方法与DNA不同。DNA样品可先通过凝胶电泳进行分离，再用碱处理凝胶使DNA变性。而RNA不能用碱变性,因为碱会导致RNA水解。因此，在Northern印迹前，须进行RNA变性电泳，在电泳过程中使RNA解离形成单链分布在凝胶上，再进行印迹转移。RNA变性电泳的原理，是用一定剂量的乙二醛-二甲基亚矾，或甲醛和甲基氢氧化汞等处理分子生物学技术62513RNA样品和凝胶，使双链RNA在电泳过程中变性而完全解离形成单链。2.杂交反应的基本过程杂交反应包括预杂交、杂交和漂洗几步操作。

预杂交的目的是用非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物(Denhart’s溶液)将待测核酸分子中的非特异性位点封闭，以避免这些位点与探针的非特异性结合。杂交反应是使单链核酸探针与固定在膜上的待测核酸单链在一定温分子生物学技术62513度和条件下进行复性反应的过程。杂交反应结束后，应进行洗膜处理以洗去非特异性杂交以及未杂交的标记探针，以避免干扰特异性杂交信号的检测。膜洗净后,将继续进行杂交信号的检测。分子生物学技术62513(四)核酸探针技术在动物检疫中的应用

核酸探针技术是目前分子生物学中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA或DNA序列的有力工具。核酸探针可用以检测任何特定病原微生物，并能鉴别密切相关的毒(菌)株和寄生虫。目前，各种常见病毒病的诊断和研究都已应用到核酸探针技术，这方面的研究报道数以万计且与日俱增。但该项技术的操作毕竟比常规方法复杂，费用较高，在动物检疫中尚未推广。多在实验室内对病原作深入研究时使用。分子生物学技术62513分子生物学技术一、分子生物学概念二、核酸探针技术三、PCR四、分子生物学技术62513

一、分子生物学概念

（一）基本概念

（二）基因的碱基顺序与蛋白质的氨基酸顺序

（三）基因的结构

（四）基因的表达与调控

分子生物学技术62513

（一）基本概念

基因：是编码蛋白质或RNA分子遗传信息的基本遗传单位。从化学角度观察，基因则是一段具有特定功能和结构的连续的脱氧核糖核酸序列，是构成巨大遗传单位染色体的重要组成部分。

顺反子：顺反子和基因这两个术语是互相通用的。一般来说，一个顺反子既是一个基因，大约含有1500个核苷酸对，是由一群突变单位和重组单位组成的线性结构。分子生物学技术62513因此，顺反子概念表明：基因不是最小单位，它仍然是可分的；并非所有的DNA序列都是基因，而只有其中某一特定的多核苷酸区段才是基因的编码区。

每一个顺反子就是一段核苷酸序列，或者是一个基因的DNA或RNA单元，它编码一种完整的多肽链。顺反子是功能单位，它是由许多可以突变的位点组成的，而这些位点之间又可以发生交换。

多体蛋白质（multimericproteins）：由数个亚基组成的蛋白质。分子生物学技术62513同型多体蛋白质：在多体蛋白质中，如果所有的亚基都是同样的，这种蛋白质就属于同型多体（homomultimer）蛋白质，由一种基因编码。

异型多体（heteromultimer）蛋白质：亚基各不相同的蛋白质，由多种基因编码。如血红蛋白。

分子生物学技术62513（二）基因的碱基顺序与蛋白质的氨基酸顺序

1.中心法则（centraldogma）：既遗传信息是从DNA流向RNA，再由RNA流向蛋白质

而遗传信息从DNA直接到蛋白质的传递，只是一种理论上的可能性，迄今尚未得到证实。

分子生物学技术625132.密码子：每3个碱基编码一种氨基酸，就会编码出64种（43=64）不同的氨基酸。蛋白质分子是由20种不同的氨基酸构成的，因此，1种氨基酸可有几个不同的密码子，既3个碱基甚至更多的碱基编码一种氨基酸是必要的。

遗传密码是否重叠？研究证实：遗传密码是不重叠的。

三联体之间是否存在着“逗号”？研究证实：碱基的阅读是从一个固定的起点按序进行的，不存在有什么“逗号”的问题。

…QABCQDEFQGHIQJKLQ…分子生物学技术62513（三）基因的结构

基因的编码区（即转录区）是连续不断的序列，包括一个起始密码子ATG和一个终止密码子TAA。编码区的两侧是转录而不转译的侧翼序列区，其中5`非转译区简称5`UTR，含有一个核糖体结合位点及一个转录起始信号；3`非转译区简称3`UTR含有一个转录终止信号。

无论是真核的基因还是原核的基因，都可划分成编码区和非编码区两个基本组成部分。

编码区含有大量的可以被细胞质中转译机器阅读的遗传密码，包括起始密码子（通