《光学显微镜与细胞结构观察》课件.ppt
光学显微镜与细胞结构观察探索微观世界的奇妙旅程揭示肉眼无法看见的生命奥秘
课程引言显微世界重要性揭示生命基本单位结构研究基石支撑现代生物学发展技能培养掌握微观观察基本方法
显微镜发展简史11590年扬森父子制造第一台显微镜21660年代列文虎克改进显微镜31674年首次观察到单细胞生物4现代数字化与智能化发展
光学显微镜基本概念定义利用光学原理放大微小物体的仪器基本组成光源、物镜、目镜、载物台与电子显微镜区别分辨率低但成本低可观察活体样本
光学显微镜的分类正置显微镜物镜在下方，适合常规观察倒置显微镜物镜在上方，适合培养皿细胞观察单筒显微镜单目观察，简单经济双筒显微镜双目观察，减轻视觉疲劳
显微镜主要结构目镜放大物镜形成的图像物镜直接放大标本图像载物台放置玻片标本调节器粗调与细调控制焦距
光源与照明系统光源提供稳定均匀的照明聚光器汇聚光线照射样品光栏调节光束大小与形状光圈控制通过的光量
显微镜放大原理物镜放大形成实像，主要放大作用目镜放大进一步放大物镜形成的像总放大倍数物镜倍数×目镜倍数
分辨率与清晰度分辨率定义区分两个相邻点的能力光波长影响波长越短分辨率越高数值孔径影响孔径越大分辨率越高
景深与视场景深概念清晰成像的深度范围高倍镜头景深浅视场概念一次能看到的样品范围高倍镜头视场小
显微镜的校正与调整光源调整打开光源，调至适当亮度粗调焦低倍物镜下将样品调入视野视差校正调整目镜屈光度消除双筒差异精细调焦使用细调节螺旋获得清晰图像
常见显微镜类型明场显微镜标准型，样品对比度低暗场显微镜背景黑暗，样品明亮相差显微镜增强透明样品对比度荧光显微镜观察荧光标记的结构
明场显微镜原理光源发射光线从下方照射标本吸收样品吸收部分光线形成图像背景明亮，样品较暗
暗场显微镜原理特殊照明使用环形遮光器2散射成像只有散射光进入物镜视觉效果背景黑暗，物体明亮
相差显微镜原理相位差形成光波穿过细胞产生相位变化相位板作用将相位差转换为亮度差异成像特点无需染色即可观察透明结构
荧光显微镜原理激发光照射特定波长光激发荧光分子荧光激发标记分子吸收能量发射荧光释放较长波长的光滤光分离只允许荧光通过进入目镜
显微镜操作流程(概述)检查设备确认各部件完好开启电源调整光源亮度放置样品固定玻片于载物台调整焦距从低倍到高倍逐步对焦
物镜切换及选用低倍物镜先用4×或10×找到样品中倍物镜切换到40×观察细节高倍油镜滴加浸油后使用100×
油镜的使用与维护油镜原理浸油填充空气间隙提高数值孔径与分辨率使用方法滴一小滴油于玻片轻轻旋入油镜清洁维护擦拭镜头用专用纸用二甲苯或酒精轻轻清洁
显微镜护养防尘防潮使用后套上防尘罩镜头清洁用镜头纸轻拭，勿用手触碰灯源维护不用时关闭，避免过热定期检修专业人员定期保养
常见操作误区与排查问题可能原因解决办法视野黑暗光源未开检查灯泡和电源模糊不清调焦不当重新使用粗细调焦有气泡制片不良重新制备玻片视野脏污目镜或物镜脏清洁光学元件
显微镜下的生物样品制备流程样品获取切片或刮取适量样品染色处理滴加适当染色剂盖玻片覆盖避免气泡，边缘可封蜡4镜检观察从低倍到高倍调焦
细胞结构总览真核细胞具有细胞核内含多种膜性细胞器动植物细胞属此类原核细胞无核膜包围的核区无膜性细胞器细菌、蓝藻属此类
动物细胞结构细节细胞膜磷脂双分子层结构细胞核含DNA，控制细胞活动线粒体产生能量的细胞器内质网合成、运输蛋白质
植物细胞结构细节
原核细胞(如细菌)特征核区DNA集中但无膜包围无常规细胞器缺少线粒体等膜性结构细胞壁肽聚糖构成，结构特殊核糖体70S型，小于真核细胞
显微镜下细胞的基本识别红细胞无核双凹圆盘状白细胞有核，形态多样上皮细胞片状，核明显
细胞核的观察与识别苏木精染色细胞核染成蓝紫色吖啶橙染色核酸呈绿色荧光DAPI染色DNA特异性荧光蓝色
线粒体观测方法1Janus绿染色线粒体选择性染色罗丹明123染色活细胞线粒体荧光标记3MitoTracker染料高特异性荧光示踪
叶绿体与色素体叶绿体绿色，含叶绿素胡萝卜素体橙色，含类胡萝卜素花青素体红紫色，含花青素
液泡与细胞液流动现象液泡特征植物细胞中占据大部分空间液泡功能储存养分、代谢产物细胞质流动原生质在细胞内循环运动
染色技术简述碘液淀粉染蓝黑色龙胆紫细菌染色常用苏木精-伊红组织学经典染色亚甲蓝细胞核染蓝色
典型实验1：口腔上皮细胞观察取材用消毒棉签轻刮口腔内侧涂片将材料均匀涂于载玻片染色滴加甲基蓝或龙胆紫染液观察注意细胞形态及细胞核位置
典型实验2：洋葱表皮细胞结构1取材撕取洋葱鳞片内表皮2制片铺平于载玻片3染色滴加碘液或番红染料4观察重点细胞壁、细胞核和细胞质
典型实验3：绿藻/水绵的细胞结构取样收集水绵丝状体制片水滴中铺展不重叠观察螺旋状叶绿体结构记录绘制或拍照存档
典型实验4：小棉花根尖分生组织
怎样绘制细胞结构图1观察阶段全