三植物细胞骨架的光学显微镜观察.pptx

细胞生物学实验课件 实验三植物细胞骨架的光学显微镜观察一.实验目的 1.掌握考马斯亮蓝R250?对植物细胞骨架染色的方法。 2.?通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。二.实验原理 细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。 本试验采用去垢剂TritonX-100?的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250?染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。 三.实验用品 1.材料：洋葱 2.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、50ml烧杯 药品：pH6.8的磷酸缓冲液； M-缓冲液 ：50mmolL-1 (PH?6.7)咪唑、 50 mmolL-1 KCl?、?0.5 mmolL-1 MgC12? 、 1 mmolL-1 ?EGTA?、 0.1 mmolL-1 EDTA?、?1 mmolL-1巯基乙醇、 4 mmolL-1甘油?、 1 mmolL-1 ?HCl?调pH?至7.2；1%Triton-X100:用M-缓冲液配 制；3%戊二醛：用pH6.8的磷酸缓冲配制；0.2%考马斯亮蓝 R250?染液：0.8g考马斯亮蓝R250、46.5ml甲醇、7ml冰醋酸?、 46.5ml蒸馏水。四.实验方法步骤 1.撕取洋葱鳞茎内表皮1cm2若干片，置于小烧杯中。 2.用磷酸缓冲液（pH6.8）提前浸泡2小时左右。 3.吸去磷酸缓冲液，用1% TritonX—100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像更加清晰。 4.吸去TritonX-100，用M-缓冲液洗2次，每次5分钟。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。 5.用3%戊二醛固定0.5～1h。 6.用磷酸缓冲液（pH6.8）洗2次，每次5分钟。 7.考马斯亮蓝R250?染色30分钟。 8.蒸馏水洗2次。 9.置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。五. 实验报告 1.绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。 2.说明实验过程中各步骤处理的作用。细胞骨架