豌豆异构酶PsCHI基因的克隆与表达研究.docx

豌豆异构酶PsCHI基因的克隆与表达研究

目录

豌豆异构酶PsCHI基因的克隆与表达研究（1）．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1.1异构酶研究概况．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1.2豌豆中异构酶的应用价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.2国内外研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

1.2.1豌豆PsCHI基因研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

1.2.2异构酶基因克隆与表达技术进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

1.3研究目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

1.3.1研究目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

1.3.2研究内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

2.1试验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.1.1豌豆品种与培养条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

2.1.2菌株与载体．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

2.1.3主要试剂与仪器．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

2.2试验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

2.2.1豌豆PsCHI基因的提取与测序．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

2.2.2PsCHI基因表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

2.2.3PsCHI基因在毕赤酵母中的表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

2.2.4表达产物的活性测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

3.1豌豆PsCHI基因的克隆与序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

3.1.1PsCHI基因片段的获得．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

3.1.2PsCHI基因序列特征分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

3.2PsCHI基因表达载体的构建与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

3.2.1表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

3.2.2表达载体的PCR与酶切鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

3.3PsCHI基因在毕赤酵母中的表达与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

3.3.1PsCHI基因的表达模式分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

3.3.2表达产物的Western．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

3.3.3表达产物的纯化与活性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

豌豆异构酶PsCHI基因的克隆与表达研究（2）．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

一、内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

1.1研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

1.2研究意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

1.3研究内容与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．